12培养(péiyǎng)细胞的取材4培养细胞(xìbāo)的取材678组织材料(cáiliào)的分离组织材料(cáiliào)的分离111213141516原代细胞培养1819202122表皮细胞在人和动物体内，表皮细胞生长在胶原基质膜上，并从基质膜获取生长分化所需要的物质，因此体外培养培养需要使用某些基质、培养液及包括(bāokuò)滋养层在内的一些添加物。无菌切取皮肤(pífū)标本，用DBSS冲洗3～5遍。将标本的上皮层面朝下放入干燥的培养皿中，加数滴PBS使之湿润，用弯剪尽可能除净皮下脂肪和结缔组织，将标本切成大约1cmX2cm的小块。用无Ca2+、Mg2+的PBS冲洗标本至少3次，将标本放入胰蛋白酶溶液中或中性分散酶II中，4℃放置15-48h，或37℃1-3h。几种(jǐzhǒnɡ)细胞培养方法举例滋养层细胞制备在已形成单层的3T3细胞培养瓶中加入丝裂霉素，使3T3细胞不在分裂增殖，即可作为表皮细胞的黏附滋养细胞。黏壁剂包被用0.01%的胶原蛋白铺于培养瓶的底部，过夜，弃上清，40℃烘干，制成胶原蛋白黏附膜，紫外线照射2h消毒(xiāodú)备用。2728以1～5X105个细胞的密度接种在适量DMEM或FAD培养液中，37℃培养1-3天，细胞贴壁后，冲洗未贴壁细胞。传代培养：0.05%-0.1%的EDTA孵育10-30min，细胞变圆后，在用0.1%的胰蛋白酶和0.05%EDTA消化(xiāohuà)，吸管吹打是细胞完全脱壁。3031323334353637383940对于股骨中骨髓细胞的分离，则可以采取冲洗(chōngxǐ)股骨腔的方法获得。实验(shíyàn)材料小鼠的处死：颈椎脱位法右手(yòushǒu)（左手）抓住鼠尾用力向后拉，同时左手（右手(yòushǒu)）拇指与食指用力向下按住小鼠头部，在颅骨基部的后侧与颈椎两侧，施加压力，使头颅和脑一起与脊髓分离。当脊髓与脑分离时，伴有大量的肌肉活动。经研究证明，这种方法能使实验动物对痛觉不再敏感。股骨(gǔgǔ)骨髓细胞悬液的制备4546474849505152535455