第十四基因重组与基因工程第十四基因重组与基因工程一、同源重组二、细菌得基因转移与重组质粒:细菌染色体外得环状双链DNA分子。可接合质粒,如F因子(Ffactor)(二)转化作用(transformation):通过自动获取或人为地供给外源DNA,使细胞或培养得受体细胞获得新得遗传表型。(三)转导作用(transduction):当病毒从被感染得(供体)细胞释放出来、再次感染另一(受体)细胞时,发生在供体细胞与受体细胞之间得DNA转移及基因重组即为转导作用。第二节重组DNA技术大家学习辛苦了，还是要坚持一、重组DNA技术相关概念生物技术工程:基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等(二)工具酶限制性核酸内切酶DNA聚合酶I逆转录酶T4DNA连接酶碱性磷酸酶末端转移酶TaqDNA聚合酶限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease):识别DNA得特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA得一类内切酶。Ⅱ类酶识别序列特点—回文结构BamHⅠ(三)目得基因(又称外源DNA)cDNA:经反转录合成得、与RNA(mRNA或病毒RNA)互补得单链DNA。基因组DNA:在真核生物体,基因组就是指一套完整单倍体DNA(染色体DNA)与线粒体DNA得全部序列。(四)基因载体(克隆载体):为携带目得基因,实现其无性繁殖或表达有意义得蛋白质所采用得一些DNA分子。常用载体:质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA克隆载体(cloningvector):为使插入得外源DNA序列被扩增而特意设计得载体。表达载体(expressionvector):为使插入得外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计得载体。二、重组DNA技术基本原理及步骤(一)目得基因得获取组织或细胞染色体DNA3、cDNA文库:以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补得DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后转入受体菌,即获得cDNA文库(cDNAlibrary)。组织或培养细胞(二)克隆载体得选择常用载体:质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA载体得选择标准:能自主复制;具有两个以上得遗传标记物,便于重组体得筛选与鉴定;有克隆位点(外源DNA插入点),常具有多个单一酶切位点,称为多克隆位点;分子量小,以容纳较大得外源DNA。(三)外源基因与载体得连接1、粘性末端连接:同一限制酶切割位点连接配伍末端连接2、平端连接适用于:限制性内切酶切割产生得平端粘端补齐或切平形成得平端3、同聚物加尾连接由末端转移酶作用下,在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端,再进行粘端连接。4、人工接头:由平端加上新得酶切位点,再用限制酶切除产生粘性末端,而进行粘端连接。(四)重组DNA导入受体菌:受体菌条件:安全宿主菌限制酶与重组酶缺陷处于感受态导入方式:转化(transformation)转染(transfection)感染(infection)(五)重组体得筛选原位杂交