细胞培养定义(dìngyì)细胞培养的基本概念接触抑制（Contactinhibition）体外培养的细胞增殖能力不是无限的，传代次数(cìshù)有一定的界限，称为“Hayflick极限”。传代次数(cìshù)与物种寿命有关：小鼠寿命3年，传代12次；龟寿命200年，传代140次。传代次数(cìshù)与个体年龄成反比：人胚胎，40-60代；幼年，20-40代；成年，10-30代；早老病儿童，2-10代。原代培养细胞(xìbāo)的生命归宿/TheAmericanTypeCultureCollection(ATCC)TheEuropeanCollectionofAnimalCellCulture(ECACC)NationalInstituteofHealth(NIH),USANationalCancerInstitute(NCI),USA有限(yǒuxiàn)细胞系，无限细胞系细胞系cellline细胞株cellstrain培养(péiyǎng)细胞的特性每代贴附生长(shēngzhǎng)细胞的生长(shēngzhǎng)过程游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态(zhuàngtài)．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟一4小时贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些(zhèxiē)带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）/潜伏期此时细胞有生长(shēngzhǎng)话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳(zuìjiā)，最适合进行实验研究。停止期（平台期）：细胞(xìbāo)长满瓶壁后，细胞(xìbāo)虽有活力但不再分裂机制：接触抑制、密度依赖性/二、细胞培养基本(jīběn)要求培养细胞生长(shēngzhǎng)的条件常用(chánɡyònɡ)仪器设备压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用(cǎiyòng)滤过法除菌超净工作台：为细胞操作提供无菌环境紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒超净台滤器/CO2培养箱/自动(zìdòng)双重纯水蒸馏器纯水仪酶标仪微孔(wēikǒnɡ)板震荡器Cultureflask浸泡(jìnpào)（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、流水冲洗、蒸溜水浸泡(jìnpào)和冲洗、50℃烘干清洁液的配制(pèizhì)细胞(xìbāo)培养基培养基的选择(xuǎnzé)血清(xuèqīng)使用注意事项凝絮物：发生之原因有许多种，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin)造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身之品质。若欲减少这些凝絮沉淀物，可用离心3000rpm,5min去除，或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沉淀物，因为会阻塞过滤膜。显微镜下观察之“小黑点”：通常经过热处理之血清，沉淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沉淀物增多，更会误认为微生物之增殖，但以培养细菌之培养基检测，又没有污染。一般而言，此小黑点应不会影响细胞之生长(shēngzhǎng)，但若怀疑此血清之品质，应立即停用，更换另一批号的血清。如何(rúhé)避免沉淀物的产生?谷氨酰胺酚红水：新鲜配置(pèizhì)的三蒸水或去离子水平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20加水至1000ml抗菌素的使用：在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制(yìzhì)可能存在的细菌的生长。通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。庆大霉素：每毫升100单位——方便、广谱、稳定完全(wánquán)培养基的组成培养基的配制(pèizhì)细胞(xìbāo)消化液三、细胞培养基本(jīběn)技术鼠胎组织细胞原代培养(péiyǎng)/换液：全量换液和半量换液换液时机的选择：培养液pH值：细胞(xìbāo)