溶葡萄球菌酶复合剂体外抗猪大肠杆菌作用检测本研究为委托检测，按照委托方要求进行试验。一、材料待检样品：由委托方提供，编号分别为1＃、2＃、3＃和4＃，外观为白色粉未。另购商品级饲料添加用溶菌酶复合剂作为对照，编号5＃。培养基：MH肉汤和药敏试纸，购自杭州天和生物试剂公司。MH肉汤琼脂平板，按说明书方法配制。试验菌株：EC-130和EC-142大肠杆菌购自上海卫生防疫站，同时产不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）。193＃、LT8-1、LT16-1、LT9-2、ST13-1、LTST9-1、LTST12-1大肠杆菌分离自临床腹泻仔猪，产不耐热肠毒素（LT）或／和耐热肠毒素（ST）。二、方法1、抑（杀）菌作用试验纸片法：称取各样品适量，溶于灭菌蒸馏水中成2％或10％浓度，滴加于直径5mm的灭菌滤纸片上，每片约含2ul药液，阴凉干燥，4℃贮存备用。分别取EC-130和139＃菌株接种于2毫升MH液体培养基中，37℃培养过夜。取过夜培养的新鲜菌液适量，稀释后取0.5毫升均匀涂布于MH平板。待平板表面菌液完全吸收无积液后，贴加各样品纸片试样，倒置37℃培养过夜，测量抑菌圈直径的大小，判定结果。2、抗菌素抑（杀）菌比较试验纸片法：实验方法同上，试验菌株为EC-130。根据抑（杀）菌作用试验结果，选取3＃和4＃样品进行对比试验，同时贴加不同的抗生素药敏纸片。3、最低抑（杀）菌浓度试验试管法：取灭菌的MH液体培养基，将各待检样品稀释成不同含量，每管2ml，分别每管接种37℃培养过夜的EC-130和139＃大肠杆菌5ul，再37℃培养过夜，观察各试管细菌生长情况。完全抑制细菌生长的最高稀释培数为试验样品的最低抑菌浓度。4、不同作用时间的抑（杀）菌效率试验试管法：取37℃过夜培养的EC-130和139＃菌株，用MH培养液稀释成1OD，分别加入各待检样品，使成最低抑（杀）菌浓度，37℃培养并立即计时。分别在作用5和8小时取样，作连续10倍稀释。定量取适当二个连续稀释度菌液0.5毫升，均匀涂布于MH平板，每个稀释度重复二次，待平板表面菌液完全吸收无积液后，倒置37℃培养过夜。计数每平板菌落数量，与不加药液的细菌数量对照，计算各时间点各待检样品的抑（杀）菌率。5、临床分离的致病性大肠杆菌抑（杀）菌试验试管法：将7株猪场临床分离的致仔猪腹泻大肠杆菌分别接种于2毫升MH液体培养基中，37℃培养过夜。取灭菌的MH液体培养基，将各待检样品系列稀释成不同含量，每管2ml。将每株37℃培养过夜的大肠杆菌，分别接种每种系列稀释的试验样品管中，每管接种菌液5ul，再37℃培养过夜，观察各试管细菌生长情况。完全抑制细菌生长的最高稀释培数为试验样品的最低抑菌浓度。三、结果（一）抑（杀）菌作用试验：（1）1和2号样品对EC-130和193＃大肠杆菌均无任何抑菌作用；（2）3和4号样品对EC-130大肠杆菌均有抑菌作用，3号样品抑菌圈直径约20mm，4号样品抑菌圈直径约9mm。（3）4号样品对193＃大肠杆菌也有明显的抑菌作用，抑菌圈直径均为约9mm。而3号样品对193＃大肠杆菌无抑菌作用。EC-130大肠杆菌193＃大肠杆菌（二）抑（杀）菌效果与部分抗菌素比较试验：3号样品对大肠杆菌的抑菌圈直径与庆大霉素、先峰V号和丁胺卡那相似，大于多粘菌素，但小于环丙沙星。4号样品的抑菌圈直径均小于试验所用抗菌药物（见下表和图）。药物名称抑菌圈直径(mm)环丙沙星36庆大霉素18丁胺卡那18先峰V号20多粘菌素133＃样品224＃样品8先峰V号先峰V号多粘菌素多粘菌素环丙沙星环丙沙星丁胺卡那丁胺卡那庆大霉素庆大霉素3号样品对比结果4号样品对比结果（三）最低抑（杀）菌浓度试验：各样品最低抑菌浓度为2号0.25mg/ml、3号0.5mg/ml、4号0.13mg/ml、5号1.0mg/ml样品2.00mg/ml1.00mg/ml0.50mg/ml0.25mg/ml0.13mg/ml0.06mg/ml0.03mg/ml2－－－－＋＋＋3－－－＋＋＋＋4－－－－－＋＋5－－＋＋＋＋＋注：－表示细菌不生长，＋表示细菌生长。3号样品检测结果2号样品检测结果5号样品检测结果4号样品检测结果（四）不同时间的抑（杀）菌效率试验用无抗药性的标准大肠杆菌（EC-130）进行试验，3号样品和5号样品在2.5小时内杀菌效力可达75.7-87.7%，而2号样品和4号样品的杀菌效率仅25.5-33.0%。样品稀释度0小时0.5小时1小时2.5小时计数杀菌率计数杀菌率计数杀菌率计数杀菌率2号样105828539.534.9%64422.2%55533.0%3号样10582863323