学习目标重难点凝胶层析的原理一.凝胶层析的原理一.凝胶层析的原理一.凝胶层析的原理一.凝胶层析的原理葡聚糖凝胶是指由天然高分子－葡聚糖与其它交联剂交联而成的凝胶。商品名分别为Sephadex和Sephacryl。不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200为每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分布范围。二.凝胶层析的介质及选择琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。聚丙烯酰胺凝胶指的是由丙烯酰胺单体，以次甲基双丙烯酰胺为交联剂，经四甲基乙二胺催化、通过游离基引发(光引发、化学引发等)聚合而成的交联聚丙烯酰胺。它是一种化学合成的人工凝胶。是实验室用来作凝胶电泳的材料。亦有人使用作隆胸整型手术用途，好处是无需开刀，可以直接注射入乳房，从而达致隆胸的效果。有香港妇女在上海做完手术之后引致乳房发炎含脓，而需要把一边乳房切除。另外，在香港亦有整型医生指出有求诊者在不合法的美容院做过手术后，由于注射位置出错，使凝胶沿着淋巴腺或血管游走至胸腔或身体其他地方。聚丙烯酰胺凝胶指的是由丙烯酰胺单体，以次甲基双丙烯酰胺为交联剂，经四甲基乙二胺催化、通过游离基引发(光引发、化学引发等)聚合而成的交联聚丙烯酰胺。它是一种化学合成的人工凝胶。是实验室用来作凝胶电泳的材料。亦有人使用作隆胸整型手术用途，好处是无需开刀，可以直接注射入乳房，从而达致隆胸的效果。有香港妇女在上海做完手术之后引致乳房发炎含脓，而需要把一边乳房切除。另外，在香港亦有整型医生指出有求诊者在不合法的美容院做过手术后，由于注射位置出错，使凝胶沿着淋巴腺或血管游走至胸腔或身体其他地方。聚丙烯酰胺简称PAM、结构式为[－CH2－CH(CONH2）]n－，分子量100～500万。聚丙烯酰胺主要有两种商品形式，一种是粉末状的，另一种是胶体，还有聚丙烯酰胺乳液(上海合成树脂研究所研制）。易溶于冷水，速度很慢，高分子量的聚丙烯酰胺当浓度超过10%以后．就会形成凝胶状结构。提高温度可以稍微促进溶解，但温度不得超过50℃，以防发生分子降解。难溶于有机溶剂。温度超过120℃时分解，中性，无毒。1）絮凝作用原理：PAM用于絮凝时，与被絮凝物种类表面性质，特别是动电位，粘度、浊度及悬浮液的PH值有关，颗粒表面的动电位，是颗粒阻聚的原因加入表面电荷相反的PAM，能使动电位降低而凝聚。2）吸附架桥：PAM分子链固定在不同的颗粒表面上，各颗粒之间形成聚合物的桥，使颗粒形成聚集体而沉降。3）表面吸附：PAM分子上的极性基团颗粒的各种吸附。4）增强作用：PAM分子链与分散相通过种种机械、物理、化学等作用，将分散相牵连在一起，形成网状。二.凝胶层析的介质及选择三.影响凝胶层析效果的因素三.影响凝胶层析效果的因素三.影响凝胶层析效果的因素三.影响凝胶层析效果的因素