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会计学沉淀定义沉淀特点应用范围沉淀分类盐析法有机溶剂沉淀法选择性变性沉淀法等电点沉淀法离子型聚合物沉淀法聚电解质沉淀法高价金属离子沉淀法活性蛋白非活性蛋白理化性质溶解度提取方法盐析沉淀步骤加沉淀剂方式陈化条件脱盐处理盐析机理示意图①盐离子与蛋白质分子争夺水分子,降低了用于溶解蛋白质的有效水量,减弱了蛋白质的水合程度,破坏了蛋白表面的水化膜,导致蛋白质溶解度下降;②盐离子电荷的中和作用,使蛋白质溶解度下降;③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化,使水活度降低。Cohn方程式logS=β-KsIKs盐析β盐析二次盐析图1碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图不同蛋白质的溶解度曲线蛋白质的盐析分布曲线溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)对β影响对Ks影响盐种类盐浓度温度pH值无机盐种类的影响温度的影响pH对β的影响蛋白质起始浓度的影响二次盐析盐析操作3等电点沉淀实例4有机溶剂沉淀原理图有机溶剂沉淀实例酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氢二钠溶液,37℃水浴保温2h,室温搅拌3h,离心收集上清液,升温至55℃,保温20min后迅速冷却离心去除热变性蛋白,上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。(1)非离子型聚合物沉淀法(2)聚电解质沉淀法(3)金属离子沉淀法(4)亲和沉淀凝聚技术絮凝技术第五章沉淀法课后练习