一．开机前：添加自己所需要的流动相1．有机溶剂：检查自己使用的有机溶（一般为甲醇或乙腈）是否需要添加，添加过程中取下溶剂瓶，将过滤头和管线保护好，防止污染；添加溶剂后，盖紧瓶塞。2.水相：取超纯水，用0.22µm的过滤膜抽滤。然后将棕色瓶取下，超声清洗5min，确保瓶内无杂质，用抽滤过的水冲洗3次，再将抽滤过的超纯水置于棕色瓶瓶内，拧紧瓶塞，过程中也要防止过滤头和管线污染。注：每次实验都要使用fresh的抽滤水3.缓冲盐：用抽滤过的超纯水配置缓冲盐，然后再用0.22µm的过滤膜抽滤，再转移至棕色瓶中。4.酸溶液：用抽滤过的超纯水配置相应浓度，一般酸含量为百分之零点几，防止浓度过大，损害分离柱。5.C瓶异丙醇：每次实验检查异丙醇，若没有就即刻配制，异丙醇浓度为10%或稍微大于10%，，用抽滤过的超纯水制备。注意：当使用的流动相涉及到盐溶液的时候，必须伴随着异丙醇的冲洗，因为盐会增加内部密封垫的磨损，及时将磨损下来的黑屑冲洗掉，避免堵塞柱子。当流动相为水和有机溶剂的时候，可以不适用异丙醇。二．开机实验一．开机：1.打开计算机，同时打开HPLC机器的各模块电源，待模块自检完成后，双击打开桌面上的化学工作站软件-联机图标。2.在化学工作站软件中启动泵、柱温箱和检测器波长（启动/关闭按钮模块右下角），在分别在各模块设置所需要的HPLC条件（左键点击模块，选择“设置泵/柱温箱/VWD信号”）。注意，在启动泵之前将purge阀拧松，避免启动时阻尼过大，影响启动。3.单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。单击确定。二．平衡系统：1.设定好所需要的HPLC洗脱条件（即流动相比例、温度和检测波长），打开purge阀流速调为5mL/min,ch冲洗5min,目的是（1）快速的将purge阀前面的管线系统置换成你所用的流动相比例，节省平衡分离柱的时间。（2）排除掉在更换流动相过程中进入的气泡。2.将流速设为1mL/min，关闭purge阀，冲洗30min后，即可将分离柱平衡，使基线平行；若基线不平可延长冲洗时间，平衡分离柱。三．进样:1.进样前：修改样品信息，修改样品的详细信息（工具栏点击运行控制——选择“样品信息”）。2.进样：进样针取样品，若有针内有气泡可往复吹打赶出气泡，将进样器的阀打到“LOAD”状态，进样针插入到底部，将样品慢慢打入，然后将阀打到“ENJECT”状态，系统自动运行采集数据。三．实验结束冲洗系统和关机原则是最终要用90%的甲醇保存分离柱，因此冲洗系统时，先用大比例的水相冲洗，然后再用90%的甲醇冲洗，其目的是既可以先将溶于水的杂质冲洗下来，又可以将溶于有机溶剂的杂质冲洗下来，最终还可以用90%的甲醇保存分离柱。步骤：1.打开purge阀即拧松，将流动相改为水和甲醇，比例为90:10，流速5mL/min,冲洗5min，目的是将泵入口之前的部分快速置换成水:甲醇=90:10,然后将流速改为1mL/min,确定后关闭purge阀，一般冲洗30min，若30min基线不平，可适当延长冲洗时间。2.大比例的水冲洗之后，打开purge阀，将流动相比例水:甲醇=10:90，流速5mL/min,冲洗5min，目的是将泵入口之前的部分快速置换成水:甲醇=10:90,然后将流速改为1mL/min,确定后关闭purge阀，一般冲洗30min，若30min基线不平，可适当延长冲洗时间。3.冲洗完成后，在工作站中关闭各模块，然后关闭工作站，最后关闭各模块的电源。！！！！！切记，在使用purge时，5mL/min的流速时一定要确保purge阀是打开的即拧松的状态，因为在高流速时，关闭purge阀会使系统压力增高，造成系统漏液，柱头塌陷，甚至会将一些模块破裂。