第三章生物药物的微生物限度检查第一节生物药物被微生物污染后引起的质量变化一、生物药物染菌的范围与原因1.范围涉及全部剂型，各种药物2.原因@微生物的特征个体小，种类多，繁殖快@生产过程和设备“死角”@制药原料和药物本身的性质植物性原料：土壤微生物，植物病原菌，人兽粪便动物性原料：寄生微生物，病原微生物二生物药物被微生物污染后引起的质量变化药品理化性质改变表现为外观、气味、染色、稠度、PH、产生气体等药品含微生物毒性代谢物黄曲霉药效的变化药物失活三意义保证药品质量检测药物生产工艺的科学性,合理性和管理水平第二节微生物限度检查法灭菌制剂：系指采用某一物理、化学方法杀灭或除去所有活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。①注射用制剂②眼用制剂③植入型制剂④创面用制剂⑤手术用制剂无菌检查操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净验证。培养温度和时间本检查法中细菌培养温度为30~35ºC；时间为48小时。霉菌、酵母菌培养温度为23~28ºC；时间为72小时。控制菌培养温度为35~37ºC；时间为48小时。眼用制剂微生物限度检查用薄膜过滤法，培养时间为7天。三微生物限度检查步骤1.供试品的制备2.限度检查方法①、常规法②、稀释法③、离心沉淀集菌法④、薄膜过滤法⑤、中和法⑥、离心和培养基稀释法⑦、离心和薄膜过滤法微生物限度检查常用检验设备及器材直形吸管1ml，10ml量杯10ml试管18x180mm，13x200mm，30x200mm试管筒培养皿9cm培养皿筒陶瓦盖12cm量筒100ml，500ml，1000ml滤器及微孔滤膜孔径0.45±0.02um注射器1ml，5ml，10ml，30ml载玻片及盖玻片接种针及接种环试管架乙醇灯康氏振荡器离心机500～4000／min紫外灯365nm玻璃或搪瓷消毒缸（带盖）大、小橡皮乳头乙醇棉球或碘伏棉球灭菌剪刀、镊子、钢锥灭菌称样纸灭菌不锈钢药匙火柴、记号笔（玻璃铅笔）白瓷盘、洗手盆实验记录纸4．含抑菌成分供试品凡含防腐剂或抑菌成分且影响检验（供试品按常规检查法，加入规定量的对照菌，不能检出时）的供试品，可根据供试品的性质，控制菌的特性及检验条件等按以下方法之一或两种以上方法联合应用处理后，依法检查。同时做阳性和阴性对照。①稀释法：将供试品种入较大量的培养基中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度（使该供试液稀释至阳性对照菌能生长的浓度）。此法用作控制菌检查和限度检查。本法适用于抑菌作用不强的中药、化学药品的检验。②离心沉淀集菌法：取规定量的供试液于无菌刻度离心管中，离心（每分钟3000转）30分钟，弃去上清液，留底部集菌液约2ml，再稀释成原规定的供试液。如有不溶性药渣，可先离心（每分钟500转）5分钟，取全部上层液，再行集菌处理。本法适用于一些抑菌作用不强的中、西药品，如蜜丸、水丸、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂及液体制剂。③薄膜过滤法：取规定量的供试液，置稀释剂100ml中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm、孔径不大于0.45um±0.02um的微孔滤膜过滤器中，减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜3次，每次50～100ml，取出滤膜备检。冲洗时每次最好不少于100ml，可以将培养基加入滤器或取出滤膜，加入增菌培养基中，可以用加入滤器中供试品的量来控制检验量，也可以把滤膜取出来剪成2～4片，使每片相当于供试品1g或1ml，放入增菌培养基中，作控制菌检验。本法适用于水溶性抑菌成分的中、西药品和滴眼剂等制剂的“灭活”处理。安放滤膜时，注意滤膜与滤器应密合，防止滤膜破损、漏液。本法所用滤膜孔径0.45um±0.02um。④（钝化）中和法：凡含磺胺、汞、砷类或防腐剂的供试品，可用相应的试剂钝化活性因子，中和毒性后制成供试液。磺胺类药物中和法取规定量含磺胺类的供试品，于100ml增菌液中加入含1％对氨基苯甲酸约1～5ml（以前讲加入0.5ml）。本法用于含磺胺较少的制剂，如：三黄软膏、消炎眼药水、斑马眼药水等。应用本法可因供试品的不同，对氨基苯甲酸的用量可适当调整。含砷、汞等重金属药物中和法，取规定量的供试品，加入硫乙醇酸盐培养基100ml中，作增菌培养。三微生物限度检查步骤1.供试品的制备2.限度检查方法①、常规法②、稀释法③、离心沉淀集菌法④、薄膜过滤法⑤、中和法⑥、离心和培养基稀释法⑦、离心和薄膜过滤法