会计学内容目录扩增产物控制在50-150bp，以便获得最大扩增效率。探针长度设计在13-25bp，且位置不与上下游引物重叠。探针Tm值控制在65-67度，GC含量在30-80%。探针5'端避免G，以免淬灭荧光基团.两条探针的Tm值相差不要超过1℃SNP位置应在探针的1/3-2/3处(5’-3’),必要时，可以移向3’端，但不可以放在最后两个碱基的位置上。primerexpress软件设计SNP引物教程-以rs2243106为例（2）因此，可以通过点击SNP号，进入SNP位点的详细信息页面中(左图)，点击”FASTA”小标签（红圈），获得SNP位点上下游序列信息。注意，SNP位点以兼并碱基的形式给出，即Y代表了C/T。（右图绿色字母）。将其全部复制下来。2.打开PrimerExpress软件，点击新建图标①，在type中选择taqmanMGBAlleicDiscrimination②,点击OK3.之后，上图中黑色区域会变为白色活动工作页面；将在NCBI中复制的FASTA格式的序列全部粘贴进去。4.人工指定SNP。选中上图中的Y，将其改为C①；再选中改好的C，此时，菜单栏中的图标②会亮起，点击图标后，软件会要求使用者根据多态性选择另一个碱基③，本例中其多态性为T；点击T后，选中的字母C会再次变回Y。此时，完成了指定SNP位点。5.完成指定SNP位点后，会变回字母Y（红底），也就是指定SNP位点成功了。此时，就可以点击“绿色播放”按钮①，软件就会自动设计上下游引物和探针。6.软件完成设计后，会生成下图结果报告。在candidateprimers&probes中，可以方便的选择引物对，选定之后，可以点击sequence标签，查看所在的位置，或者点击order标签内底部的export，可以方便的输出，以便复制粘贴，用于合成引物。