http://www.paper.edu.cn四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血损伤恢复作用的实验研究陈志伟1，祝彼得1，许惠玉2，刘曾敏1，陈杏花1，秦建11成都中医药大学，成都（610075）2北京中医药大学，北京（100029）E-mail：czwzp@tom.com60摘要：目的：观察四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的影响。方法：采用COγ照射和注射环磷酰胺复合制备骨髓抑制小鼠模型。应用实验血液学、造血祖细胞培养等技术方法探讨四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、骨髓造血祖细胞的增殖的影响。结果：四物汤配方颗粒能促进外周血、骨髓有核细胞数、骨髓造血祖细胞的增殖。结论：四物汤配方颗粒能促进骨髓造血功能的恢复。关键词：四物汤配方颗粒，骨髓抑制近年来，国内、外的学者对四物汤的药理作用主要集中在免疫、血液、心血管、抗放射和抗化学药物的毒性等方面，在中药复方现代化方面亦作了初步的探索[1]。四物汤配方颗粒是以中药古方“四物汤”作为其剂型基础的现代中药，采用现代工艺技术而制成。本课题拟研究颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的影响，为中药的剂型改良应用提供有价值实验依据。1.材料与方法1.1实验动物BALB/c纯系雄性小鼠50只，8～12周龄，体质量18～22g,成都中医药大学实验动物中心。动物在实验前适应环境3天后进行实验。1.2药物：四物汤配方颗粒由四川绿色药业科技发展股份有限公司生产，由我校药学院傅超美老师馈赠。1.3主要试剂环磷酰胺：上海华联制药有限公司产品，批号：041007；重组人促红细胞生成素（rhEPO）：成都地奥九泓制药厂，批号：20040603；重组小鼠白细胞介素-3（rmIL-3）：PeproTech公司，美国，批号：030248；重组小鼠粒单系集落刺激因子（rmGM-CSF）：PeproTech公司，美国，批号：030555，重组小鼠促血小板生成素（rmTPO）：PeproTech公司，美国，批号：0702262；重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）：长春金赛药业有限责任公司产品，批号：20050901。1.4主要设备超净工作台：JJT-900/1300型，北京半导体设备厂；倒置相差显微镜：CX-1O型，日本Olympus公司；全自动血球分析仪：HS-18型，意大利；Co60γ源：由四川省农业科学院生物技术核技术研究所1.5骨髓抑制小鼠模型的制备小鼠经2.0Gy60Coγ全身照射后的第4天开始腹腔注射环磷酰胺(Cy)40mg/kg（临用前配制）、每天注射一次，连续注射3天完成模型制备[2-3]。-1-http://www.paper.edu.cn1.6动物分组与给药将小鼠随机分为正常对照组、模型组、四物汤配方颗粒组、阳性对照组，每组10只。除正常对照组外，其它4组均进行造模。小鼠造模完成后24h开始给药，四物汤配方颗粒按中药药理学研究方法[4]计算小鼠的等效剂量为5g/kg.d，灌胃0.2ml，阳性对照组腹腔注射rhG-CSF125µg/kg，每只小鼠腹腔注射0.2ml。连续给药7天。1.7外周血细胞计数在给药8天后24h,经小鼠眼球后静脉丛采血20µl,稀释后用HS-18型全自动血细胞分析仪进行血常规检测。1.8骨髓有核细胞悬液的制备在给药8天后24h,颈椎脱臼处死各组小鼠，取出股骨,用6号针头以1ml生理盐水液冲出骨髓细胞,4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液。取部分骨髓细胞悬液在显微镜下按白细胞计数法进行骨髓有核细胞（BMC）计数。1.9造血祖细胞培养在给药8天后24h，颈椎脱臼处死各组小鼠，无菌条件下取出股骨,6号针头DMEM培养基冲出骨髓细胞,4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液，混合同组单细胞悬液，计数BMC并调整至所需浓度，按本实验室常规培养体系做粒系、红系和巨核系三系造血祖细胞培养，每组培养6孔，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养7天。培养第3天于倒置相差显微镜下计数CFU-E细胞集落数，培养第7天分别计数早期红系祖细胞（BFU-E）、粒系祖细胞（CFU-GM）和巨核系祖细胞（CFU-Meg）集落数。BFU-E以多于50个细胞为一个集落，CFU-E以8-32个细胞为一个集落，CFU-GM以多于50个细胞为一个集落，CFU-Meg以多于3个细胞为一个集落。1.10统计学处理实验所得数据用表示,各组数据进行方差齐性检验，同时进行单因素方差分析。2.结果2.1四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠外周血象及骨髓有核细胞的影响由表1与正常对照组相比，模型组白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白以及骨髓有核细胞均明显降低（P﹤