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会计学1964-1970发现劳氏肉瘤病毒的遗传信息传递(chuándì)方式:逆转录复制:以亲代DNA或RNA为模板,根据碱基配对(jiǎnjīpèiduì)的原则,在一系列酶的作用下,生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。一、DNA的半保留(bǎoliú)复制TestingModelsforDNAreplicationMatthewMeselsonandFranklinStahl(1958)DNA复制(fùzhì)的可能方式DNA半保留(bǎoliú)复制图示:半保留复制(fùzhì)的证明:亲代(qīndài)DNA(15N~15N)复制中的大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)染色体放射自显影图(Cairns实验)复制中的大肠杆菌染色体放射(fàngshè)自显影图DNA的半保留复制(fùzhì)的生物学意义:二、DNA复制的起点(qǐdiǎn)与方向/双向复制(fùzhì)复制(fùzhì)中的DNADNA复制的主要(zhǔyào)方式DNA的几种(jǐzhǒnɡ)复制方式亲代双链(或单链)DNA的一条链在DNA复制起点处被切开,其5'端游离出来。DNA聚合酶Ⅲ便可以将脱氧核糖核苷酸聚合在3'-OH端。当复制向前进行时,亲代DNA上被切断的5'端继续游离下来,并且很快被单链结合蛋白所结合。因为5'端从环上向下解链的同时(tóngshí)伴有环状双链DNA环绕其轴不断的旋转,而且以3'-OH端为引物的DNA生长链则不断地以另一条环状DNA链为模板向前延伸,因而称为滚环(Rollingcircle)复制。在这种复制方式中,DNA的延伸可以一直进行下去,产生的DNA链可以是亲代DNA单位长度的许多倍。这么(zhème)长的DNA链是如何转变为单位长度的DNA分子的,目前尚不清楚。可能是由特异的内切酶切开产生单位长度的子代DNA。这些DNA可自身环绕,或保持线性分子状态。双链环在固定点解开进行复制,但两条链的合成是高度不对称的,一条链先复制,另一条链保持单链而被取代,在电镜下可以看到呈D环形状。待一条链复制到一定程度,露出另一链的复制起点,另一条链才开始复制。这表明复制起点是以一条链为摸板起始合成DNA的一段序列;两条链的起点并不总在同一点上,当两条链的起点分开一定距离(jùlí)时就产生D-环(D-loop)复制。多复制(fùzhì)叉复制(fùzhì)三、DNA复制(fùzhì)的半不连续性半不连续复制(fùzhì)的发现ArthurKornberg1918四、与DNA复制(fùzhì)有关的酶和蛋白质(二)大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)DNA聚合酶DNA聚合酶催化(cuīhuà)的反应:Ⅰ[1]聚合作用在引物RNA3'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入(jìnrù)的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入(jìnrù)结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入(jìnrù)结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。[2]3'→5'外切酶活性──校对作用这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对(pèiduì)的DNA生长链末端的核苷酸。/[3]5'→3'外切酶活性──切除修复作用从5‘→3’方向水解DNA生长链前方(qiánfāng)的DNA链,主要产生5‘-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分(双链)磷酸二酯键有切割活力作用。每次能切除10个核苷酸,而且DNA的聚合作用能刺激5'→3'外切酶活力达10倍以上。因此,这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5'末端DNA引物的去除依赖此种外切酶活性。[4]焦磷酸解作用DNApolⅠ的这种活性可以催化(cuīhuà)3'末端焦磷酸解DNA分子。这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链,可以认为是DNA聚合作用的逆反应,而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。(dNMP)n+XPPi→(dNMP)n-x+X(dNPPP)→DNA[5]焦磷酸交换作用催化(cuīhuà)dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA2、DNA聚合酶Ⅱ:3、DNA聚合酶ⅢDNA聚合酶Ⅲ全酶的亚基组成(zǔchénɡ)DNA聚合酶Ⅲ的异二聚体DNA聚合酶Ⅲ的β-钳子(qiánzi)俯视图大肠杆菌三种(sānzhǒnɡ)聚合酶比较(三)DNA连接(liánjiē)酶:连接(liánjiē)DNA双链中的单链切口DNA连接酶作用(zuòy