水稻病毒的主要检测方法：ELISA基本原理：dot-ELISA实验方法：三、试剂：(1)磷酸盐缓冲液(10xPBS,PH7.4):80gNaCl,2gKCl,1.44gHP,2.4gKP,溶于800mL蒸馏水后,定容至1000mL;(2)包被液(0.05mol/L碳酸盐缓冲液,pH9.6):1.59g,2.93gNaHC,溶于800mL蒸馏水中后,定容至1000mL;(3)封闭液:a、称取5g脱脂奶粉溶于100mLPBS-T;b、称取0.2g牛血清蛋白(BSA)溶于100mLPBS-T;(4)抗体稀释液(ELISA缓冲液):称取1g脱脂奶粉,2gPVP(polyvinyl-pyrrolidone,分子量为40000)溶于100mLPBS-T;(5)洗漆缓冲液(PBS-T):取100mL10xPBS,加入0.5mLTween-20,定容至1000mL;(6)底物:p-NPP(p-nitrophenyphosphate)(7)底物缓冲液:97mL二乙醇胺(diethanolamine),0.1gMg,溶于800mL蒸馆水中,用浓盐酸调PH至9.8,最后定容至1000mL四、仪器设备：酶标仪(Bio-rad产品);移液枪、小型台式离心机、振荡器、(Eppendorf产品);-80超低温冰(THERMO产品);以及叶片汁液提取仪、洗板机、振荡仪、超净工作台、高压灭菌锅、水浴锅、4冰箱、恒温培养箱等常规仪器和ELISA板、铝箔纸、枪头等耗材。五、实验步骤：1.包被:将单头飞風置于2mLeppendorf离心管中,并放入一颗玻璃珠,用液氮速冻后在振荡仪上振荡(频率20/s,3min),取出玻璃珠,加300µL包被液,低速离心后备用,叶片用叶片汁液提取;2.点样:样品离心后取上清液点于ELISA板上(96孔板,每100µL),4,12h;3.封闭:加封闭液,37恒温箱,孵育Ih;4.加兔抗血清(一抗):加稀释一定倍数的抗体,37°C恒温箱,孵育2h;5.加酶标二抗:二抗为羊抗兔IgG-碱性磷酸酶,(Sigmar,按1:10000稀释)溶于抗体稀释液中,37恒温箱,孵育2h;6.加显色剂:加1mg/mL的p-NPP(Sigma,溶于底物缓冲液中),置于37恒温箱,避光显色30min~50min,注意观察显色情况;7.读板:用酶标仪测定值(BIO-RAD公司生产)从第(2)步至第(5)步,每步操作之后用PBS-T洗漆液在洗板机上自动洗板3次;除封闭液加入200µL/孔洗板:其余步骤液体均加100µL/孔O相对比值=待测样品O值/阴性对照O值。当O相对比值大于1.5~2时,待测样品为阳性。酶标仪习题针对水稻病毒的检测的高通量血清方法有：（ELISA方法）、（免疫胶体金试纸条）ELISA方法的两大特点：（灵敏性高）、（特异性强）血清学检测方法关键是获得高特异性、高灵敏度的病毒抗体。酶标仪的检测单位也可以用A表示。简述ELISA方法的基本原理。把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗体)结合到某种固相载体表面。使该免疫蛋白与某种特异性的酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体在检测中由于未经过其他任何处理,所以既有免疫活性,同时又保留其酶的活性。在试验时,把受检样品(待测的抗原或抗体)与酶标抗原或抗体按不同的步骤在固相载体表面起反应。然后用缓冲液洗漆,使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开。在一定范围内,结合在固相载体上的酶量与样品中受检物质的量成一定的比例关系。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,因为产物的量与样品中受检物质的量直接相关,故可根据反应物颜色的深浅进行定性或定量分析。(5)洗漆缓冲液(PBS-T):取100mL10xPBS,加入0.5mLTween-20,定容至1000mL;(6)底物:p-NPP(p-nitrophenyphosphate)(7)底物缓冲液:97mL二乙醇胺(diethanolamine),0.1gMg,溶于800mL蒸馆水中,用浓盐酸调PH至9.8,最后定容至1000mL五、实验步骤：1.包被:将单头飞風置于2mLeppendorf离心管中,并放入一颗玻璃珠,用液氮速冻后在振荡仪上振荡(频率20/s,3min),取出玻璃珠,加300µL包被液,低速离心后备用,叶片用叶片汁液提取;2.点样:样品离心后取上清液点于ELISA板上(96孔板,每100µL),4,12h;3.封闭:加封闭液,37恒温箱,孵育Ih;4.加兔抗血清(一抗):加稀释一定倍数的抗体,37°C恒温箱,孵育2h;