利用cDNA-AFLP技术获得小麦耐盐性相关基因TaVHA-C（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）中国农业科学2006,39(9:1736-1742ScientiaAgriculturaSinica收稿日期:2005-03-21;接受日期:2006-07-05基金项目:国家自然科学基金(30370881资助作者简介:秘彩莉(1974-女,河北无极人,博士,研究方向为小麦抗逆分子生物学。通讯作者刘旭(1953-,男,河北定州人,研究员,博士,研究方向为小麦近缘种属的研究和利用。Tel:010-********;E-mail:xuliu@mail.caas.net利用cDNA-AFLP技术获得小麦耐盐性相关基因TaVHA-C秘彩莉1,2,张学勇1,温小杰1,刘旭1(1中国农业科学院作物科学研究所/农业部作物品种资源与生物技术重点实验室,北京100081;2河北师范大学生命科学学院,石家庄050016摘要:【目的】利用cDNA-AFLP技术对耐盐性受主效基因控制的小麦品系98-160盐胁迫前后基因表达的变化进行分析。【方法】对112个克隆的cDNA差异表达片段进行了Blast-x分析。【结果】约有65.2%的片段与已知基因有较高的同源性,从中筛选出18个与小麦耐盐性密切相关的片段,主要包括转录因子、与离子转运有关的蛋白、信号传导相关蛋白、胁迫相关蛋白以及与蛋白-蛋白相互作用有关的蛋白。以94号片段为基础,通过电子延伸和RT-PCR,克隆了小麦液泡膜ATPaseC亚基(TaVHA-C的全长cDNA,Northern结果表明,在胁迫的早期(0~2hTaVHA-C基因的表达基本不变,随着胁迫时间的延长(6~12h,TaVHA-C基因的表达逐渐减弱,以后(24~72h又逐渐增强。低温对TaVHA-C基因的表达有明显的抑制作用。【结论】利用cDNA-AFLP技术分离差异表达片段进行相关基因的研究是可行的。关键词:小麦;耐盐性;cDNA-AFLP;TaVHA-CIsolationofTaVHA-C,AGeneinWheatRelatedtoSalt-ToleranceviacDNA-AFLPBEICai-li1,2,ZHANGXue-yong1,WENXiao-jie1,LIUXu1(1CropScienceInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGermplasmResourcesandBiotechnology,MinistryofAgriculture,Beijing100081;2LifeScienceAcademyofHebeiNormalUniversity,Shijiazhuang050016Abstract:【Objective】98-160isawheatlinewithexcellentsalt-tolerancethatiscontrolledbymajorgenes.Theexpressionprofilesof98-160stressedbysaltfordifferenttimeswerestudiedviacDNA-AFLP.【Method】OnehundredandtwelvedifferentiallyexpressingcDNAfragmentswereobtained,whichweresequencedandanalyzedbyBlast-x.【Result】Onehundredandtwelvefragmentswereclonedandsequenced.TheBlastxanalysisshowedthat62.5%ofthesequencedfragmentsweresimilartoknowngenesinthedatabase,inwhich18cDNAweretightlyrelatedtowheatsalttolerance,mostofthemweretranscriptionfactor,transportationrelatedprotein,signaltransductionrelatedproteinandproteinsrelatedtootherstresses.Somefragmentsencodedproteinsinvolvedinprotein-proteininteraction.BasedonacDNAfragmentsimilartovacularATPaseCsubunit,full-lengthcDNAofavacularATPaseCsubunitinwheat(TaVHA-Cwaso