在组织化学术常使用荧光染料染色或作为标记物用荧光显微镜观察甲.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-11 格式:PPT 页数:25 大小:9.3MB 金币:10 举报 版权申诉
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组织学是借助显微镜研究人体的微细结构。组织学根据其研究方法的不同也可分为若干分科,如细胞学、普通组织学、器官组织学、比较组织学等。细胞学专门研究细胞的形态结构、生理及起源的问题。普通组织学研究各种组织的形态结构、起源、分化等问题。器官组织学研究器官的微细结构、机能联系及组织发生等问题。比较组织学用比较方法研究不同动物体组织结构的异同点。生理学是研究生命有机体各种机能的科学.如循环、呼吸、消化和肌肉运动等。研究对象:为人体及高等动物机体的各种机能.人体科学的研究水平:器官、系统水平的研究整体水平的研究细胞、分子水平的研究二、人体科学的研究方法(二)组织学的研究方法2.电镜技术透射电镜术(TEM)用于观察组织细胞的超微结构,需制备超薄切片(50~80nm厚)并经电子散射,根据电子束在不同结构上被散射程度的差异表现为电子密度高(黑或深灰色)和电子密度低(浅灰色)扫描电镜术(SEM)用于观察组织细胞表面结构,具有真实的立体感,无需制备切片3.组织化学术(histochemistry)应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学的原理和技术,与组织学技术结合而产生的技术,在组织切片显示某种物质的存在和分布状态及定量信息。分类:一般组织化学术免疫组织化学术原位杂交术(1)一般组织化学术:组织中的某种结构成分与所加试剂发生化学反应并呈现某种颜色,在显微镜下可观察到糖类:用PAS(过碘酸希夫)反应显示多糖和糖蛋白,呈紫红色[糖被强氧化剂过腆酸氧化后,形成多醛;后者再与无色的品红硫酸复合物(即希夫试剂)结合,形成紫红色反应产物]脂类:锇酸固定染色,呈黑色[用甲醛固定,冷冻切片,用油红O、尼罗蓝或苏丹类脂溶性染料染色,使脂类(脂肪、类脂)呈相应颜色](2)免疫组织化学(immunohistochemistry)根据抗原、抗体特异性结合原理,检测组织切片中的肽和蛋白质。用标记的抗体与组织中的抗原结合,标记物可于显微镜下观察。肽和蛋白质均具有抗原性。当把人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物,其体内会产生针对该抗原的特异性抗体(免疫球蛋白)。将抗体从动物血清中提出后,与标记物相结合,即成为标记抗体。用后者与组织切片孵育,抗体则与组织中相应抗原特异性结合,在显微镜下通过观察标记物而获知该肽或蛋白质的分布部位。标记物有荧光素(荧光显微镜观察)、辣根过氧化物酶(光镜或电镜观察)、胶体金(多用于电镜观察)免疫组织化学(荧光素标记)毛细血管内皮细胞呈vWF阳性免疫组织化学电镜像示上皮细胞膜MAM-6蛋白(A胶体金标记B辣根过氧化物酶标记)(3)原位杂交术(insituhybridization)即核酸分子杂交组织化学术,检测基因(DNA片段)的有无、基因的表达活性(mRNA)。原理:用带标记物的已知碱基顺序的核酸探针与细胞内待测核酸按碱基配对原则进行特异性原位结合(杂交),并通过对标记物的显示和检测,而获知待测核酸的有无及相对量。常用标记物有放射性核素35S、32P、3H和地高辛4.放射自显影术(autoradiography)通过活细胞对某种放射性物质的特异性摄入,以显示该物质在组织和细胞内的分布、含量和代谢过程,借以反映细胞的功能状态。[将放射性核素或放射性核素标记的物质注入体内,间隔一定时间后取材、制备切片,并在其上涂以薄层感光乳胶,置暗处曝光,再显影、定影。这样,在放射性核素或其标记物存在的部位,溴化银被还原为黑色的微细银粒,可在光镜或电镜下观察,从而获知被检物质在组织和细胞中的分布及相对含量]应用举例①用3H标记的胸腺嘧啶核苷研究DNA合成和细胞增殖状态②用125I观察甲状腺滤泡内碘化部位放射自显影像(3H-TdR掺入)↓增殖的肝细胞△非增殖的肝细胞5.细胞培养术(cellculture)把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养;培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化,以及各种理化因子对活细胞的影响培养条件:适宜营养、生长因子、pH值、渗透压、O2和CO2浓度、温度,控制污染用相差显微镜观察组织工程(tissueengineering)用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术正在构建的有皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等;其中以组织工程皮肤较为成功,已成为商品用于治疗烧伤、皮肤静脉性溃疡等疾病三、生命现象的基本生理特征及生理机能的调节适应性:当环境条件发生改变时,机体或组织的机能与结构也将在某种限度内发生相应的改变,以求与所在环境保持平衡,这种现象为适应,机体的这种能力为适应性生长与生殖:生长是个体合成代谢超过了分解代谢的结果。生殖是个体生长到一定限度时形成另一个体的过程。(二)生理机能的