细胞生物学系列CAT#:90306A-250CAT#:90306B-250低温运输、-20℃保存胰酶及胰酶-EDTA溶液Typsin/Typsin-EDTASolution使用手册V1.0北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区学院南路12号北师大留学生创业园57号楼301室QQ:944823743，449730601（销售），948393554（技术），www.tiandz.com电话：010-80638853，010-62200278（销售），15811350851（技术），order@tiandz.com产品及特点胰蛋白酶（trypsin，胰酶）使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解，导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。而乙二胺四乙酸二钠（EDTA）通过与二价钙、镁离子结合，也能使细胞分散。所以胰酶（含EDTA或不含EDTA）的消化液常用于细胞生物学研究中分离贴壁细胞。本产品特点如下：1.含EDTA和不含EDTA两种规格（A型含EDTA，B型不含EDTA）。有EDTA的胰酶效果更好，但制备原代细胞一般不能用含EDTA的胰酶（否则不容易贴壁），用于流式细胞分析得也不能用含EDTA的胰酶（否则残留EDTA会将后续缓冲液中的Ca离子螯合）。2.本产品经过过滤除菌，即开即用，非常方便。3.可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。4.高效，通常室温消化1分钟左右就可以消化大多数贴壁细胞。规格及成分成份A型包B型包装90306A250mL-90306B-250mL使用手册1份1份运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。自备试剂PBS或D-Hanks液使用方法本产品使用前需要最好提前将其从-20℃转移到4℃解冻。如需急用，可用自来水流解冻，千万不能高温水浴解冻，因为胰酶对热敏感，室温放置3小时即失活75%，60℃以上则完全变性。一、贴壁细胞的消化：吸去培养液，用无菌的PBS、D-Hanks液或无血清培养液洗涤细胞1-2次，以去除残余的、可以抑制胰酶活性的胎牛血清。加入少量37℃的胰酶或胰酶-EDTA溶液，略盖过细胞即可。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞株系消化时间有所不同，需要摸索）。其间轻扣平皿底部使细胞游离。倒置显微镜下观察，细胞明显收缩变圆并从附着面脱落，此时立即吸除胰酶细胞消化液。也可肉眼观察培养器皿底部，在细胞的形态发生明显的变化时立即吸除胰酶细胞消化液。如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞。血清可以完全抑制胰酶对细胞的消化，减少其对细胞的损伤。所得细胞悬浮液可直接用于后续实验。如果需要接种，则调节细胞浓度到5×10E4个细胞/mL，然后取所需数量的细胞到新鲜的培养基中培养。二、组织的消化：不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。注意事项1.在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免母液被细菌污染。避免反复冻融。2.胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。3.请穿实验服并戴一次性手套操作。技术资料胰酶消化液中EDTA的作用细胞之间是通过CAM（细胞粘性分子）相连的，而很多粘性分子只有在有+2价金属离子，如Ca2+,Mg2+，的存在下才能行使这种功能。EDTA是钙离子的鳌合剂，在胰酶中加入EDTA的作用简单的说就是为了增加胰酶的消化作用，减少胰消化时间，以减少酶对细胞的损伤作用。加入EDTA的消化反应不能通过加入培养液终止，必须离心才能去除EDTA，所以要掌握好消化时间。比如说你用流式细胞仪测凋亡需要加bufferbuffer里面含有钙离子，如果你用含有EDTA的胰酶消化的话那么EDTA就会和钙离子结合，对结果产生影响如果你的实验对钙离子镁离子不要求的话，那么是可以在胰酶里面加入EDTA的。做原代细胞一般不加EDTA，加了后细胞反而不贴壁。关联产品Hanks及D-Hanks溶液（91105）