细胞生物学实验教学大纲一、本课程的目的、任务：配合细胞生物学理论课的讲授，通过一系列的实验，使学生能对理论知识有更深，更直观的理解，同时掌握一些基本的细胞实验技能，了解有关细胞工程采用的手段和方法，为进一步深造和独立开展科研工作打下良好的基础。二、说明：本大纲前10个实验为必作实验，其余根据实验条件选作，每实验为3学时，共计30学时。三、教学内容：实验一普通光学显微镜的结构及主要性能目的与要求：掌握普通光学显微镜的结构、原理并能熟练操作实验仪器与材料：普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、香柏油、生物制片标本、滤纸、擦镜纸主要内容：通过对生物制片标本的观察掌握普通显微镜的使用实验步骤：1.熟悉检查→清洁→.光路调中及合轴调节→镜口率的配合,滤光片的选择→.油镜的使用→清洁作业:1.写出正确使用显微镜的操作步骤。(包括油镜的使用)2.为什么要进行镜口率的配合？实验二相差显微镜的结构、原理及其用法目的与要求：1.熟悉相差显微镜的构造及其原理2.掌握相差显微镜的操作方法3.观察记录未染色的活体组织和细胞的结构主要内容：相差显微镜的操作方法实验仪器与材料：相差显微镜(包括附件)、载玻片、盖玻片、牙签等.实验步骤：.样品的制备→熟悉结构→调节→观察作业：1.相差显微镜中所观察的象与普通显微镜中的象有何不同?2.相差显微镜中与普通显微镜结构有何不同?3.环状光阑、相板各起何作用?4.为何采用绿色滤光片?5.为什么进行合轴调节?6.相差显微镜的正确操作步骤?实验三偏光、暗视野显微镜的原理、结构及使用目的与要求：1.了解并掌握特殊显微镜的构造及原理2.熟练掌握其操作方法3.熟悉并掌握其应用领域主要内容：熟练掌握偏光及暗视野显微镜的操作实验仪器与材料：偏光显微镜、暗视野显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、棉花等实验步骤：样品的制备→调节→观察作业：1.为什么物镜NA要小于聚光器NA?2.为什么要把聚光器调到视野中只有一个清晰的亮点,并且调到中央?3.偏光及暗视野显微镜正确的操作步骤是什么,你在操作中遇到哪些问题,如何解决?实验四倒置、电视生物显微镜目的与要求：1.了解并掌握倒置、电视生物显微镜的构造及原理2.熟练掌握其操作方法3.熟悉并掌握其应用领域主要内容：掌握倒置显微镜及电视生物显微镜操作方法实验仪器与材料：倒置显微镜、电视生物显微镜、生物切片实验步骤：（一）倒置显微镜熟悉安装各部件→光路调中→放置标本→调焦→观察→记录（二）电视生物显微镜.监视器、摄像机、录象机及显微镜的连接→放置标本→调节观察→录制作业：1.倒置显微镜为何要将聚光器与物镜倒换?2.电视生物显微镜与其它特殊显微镜比较有何优点?实验五荧光显微镜的操作方法目的与要求：1.了解荧光显微镜的光学原理，结构特点及应用领域2.掌握荧光显微镜的操作方法3.观察叶绿体的荧光特性主要内容：.掌握荧光显微镜的操作方法实验仪器与材料：荧光显微镜、绿色植物实验步骤:熟悉各部件→.打开开关→按下高压启动按钮→调节→放置标本→调焦→观察作业：1.激发滤光片与阻断滤光片是否可以随便选用,为什么?2.正确的操作步骤是什么?实验六生物活体染色——观察液泡系及线粒体目的与要求：1.掌握活体染色技术的原理及方法2.观察并记录动、植物细胞的液泡及线粒主要内容：掌握活体染色技术的原理及方法实验仪器与材料：解剖器械、Ringer氏液JanusgreenB、中性红、蟾蜍、黄豆幼苗根尖、兔子、洋葱、载玻片、盖玻片、培养皿等实验步骤：样品的制备→染色→观察作业：绘出你所观察到的动植物液泡及线粒体实验七细胞的显微测量目的与要求掌握显微测撤计的基本原理及使用方法。主要内容：以人血涂片和蟾蜍血装片为材料掌握显微测撤计的使用方法实验仪器与材料：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针、生理盐水、瑞氏(wright)染色液实验步骤：样品的制备→长度测量→厚度测量作业：测五十个红细胞长径，求其平均值。实验八死活细胞鉴别目的与要求学习并掌握死活细胞鉴别的原理及方法。主要内容:1.染色排除法鉴别死活细胞2.荧光排除法鉴别死活细胞实验仪器与材料(1)器材：光学显微镜、荧光显微镜、高速离心机。(2)试剂：21％台盼蓝溶液(生理盐水配制)、o.05％苯胺黑Hanke溶液、o．02％赤药红B染液、o．15％伊红Y染液(生理盐水配制)、丙酮pH5—6的生理盐水、o．65m01儿甘露醇、二丙酸G荧光熏染液实验步骤(一)方法一：染色排除法鉴别死活细胞1.台盼蓝(TrypanBIMe)法2．苯胺黑(AnilineB1ack)法3．赤藓红(