TaKaRaCode：DRR047APrimeScript?RTreagentKitWithgDNAEraser(PerfectRealTime)（100次量）说明书宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明●制品内容●保●特存长1111223799●RNA样品制备●使用注意●操作方法●实验例●引物设计说明●引物设计服务说明●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但TotalRNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对TotalRNA样品进行DNaseI处理，以除去残存的基因组DNA。而DNaseI处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser是可以除去基因组DNA进行RealTimeRT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNAEraser，通过42℃，2min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNAEraser处理后的样品可以直接进行15min的反转录反应合成cDNA，因此，分钟内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA20合成的全过程。可以根据实验目的，选择与使用本制品合成的cDNA适用于SYBR?Green分析法和TaqMan?探针分析法，SYBR?PremixExTaqTMII（PerfectRealTime）PremixExTaqTM（PerfectRealTime）等TaKaRa、PerfectRealTime系列定量试剂组合使用。●制品内容（20?l反应×100次）1.gDNAEraser2.5×gDNAEraserBuffer*13.PrimeScript?RTEnzymeMixI*24.5×PrimeScript?Buffer2（forRealTime）*35.RTPrimerMix*46.RNaseFreedH2O7.EASYDilution（forRealTimePCR）*5100?l2001004004001?l?l?l?lml1ml×2本*15×gDNAEraserBuffer在反转录反应前使用，请务必进行基因组DNA的除去反应。*2含有RNaseInhibitor。*3含有dNTPMixture。*4含有OligodTPrimer和Random6mers。*5制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TEBuffer稀释时，由于受Microtube吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品时，即使稀释恋团ǘ纫材芄唤凶既返叵∈停菀自诳砉惴段诨竦米既范?的标准曲线。EASYDilution也可以单独购买（TaKaRaCode：D9160）。EASYDilution请与本公司RealTimePCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。●保存：-20℃。●特长1．含有去除基因组DNA的gDNAEraser，只需2min即可除去基因组DNA。2．只需15min即可高效合成RealTimePCR反应用模板cDNA，是进行2StepRealTimeRT-PCR反应的最佳试剂。3．反转录引物使用了Random6mers和OligodTPrimer混合的RTPrimerMix，可以均匀合成样品中的各种cDNA。-1-4．本制品提供了SYBRGreen分析法和TaqMan探针分析法各自最适反应体系，可以根据分析方法选择体系。5．制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASYDilution（forRealTimePCR），将TotalRNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。●RNA样品制备本制品是将RNA反转录成cDNA的专用试剂。RNA的纯度会影响cDNA的合成量，而制备RNA的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶