基因克隆的本质是把某一目的DNA片段通过无性方式进行扩增和表达，而这一过程往往是通过载体和寄主细胞来实现的。一般而言，基因克隆包括四部分工作：1、目标DNA片段的获得；2、克隆载体的构建；3、寄主细胞的转化；4、重组体克隆的选择和鉴定。目前，以大肠杆菌为寄主，以质粒和噬菌体等为载体的基因克隆体系已经相当的成熟。大肠杆菌作为寄主进行DNA克隆的实验方案PCR法定向扩增目的基因的基本原理PCR（PolymeraseChainReaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，是一种高效快速的体外DNA聚合程序使用PCR法克隆目的基因的前提条件是：已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物。基于PCR的分离法（1）直接从基因组中扩增提取基因组DNA作模板根据目的基因序列设计引物PCR扩增适合扩增原核生物基因。真核生物基因组含有内含子！基于PCR的分离法（2）从mRNA中扩增:RT-PCR提取基因组totalRNA反转录合成总cDNA作模板根据目的基因序列设计引物PCR扩增适合扩增真核生物基因。原核生物不易得到mRNA，也不含有polyA尾。基于PCR的分离法（3）同源序列克隆法依据：自然界的长期进化中，一些蛋白质的基因编码序列保持着高度的保守性，在生物的种属之间，基因编码序列有着很高的同源性。方法：根据同源序列设计引物进行PCR扩增，利用PCR产物进行RACE扩增或结合DNA文库进行分离目的基因。RACE：根据已得到的不完整的cDNA序列设计引物对mRNA3‘端和5’端进行克隆，可获得全的cDNA克隆。（RACE克隆的意义）1、根据基因编码蛋白同源序列，或多个同源基因cDNA序列设计（简并）引物，RT-PCR克隆核心序列，测序。2、根据核心序列，设计新的引物进行cDNA的3’端和5’端的扩增。3、拼接成cDNA全序列的信息，设计新的引物扩增全长cDNA序列。3’RACE：由含有oligo（dT）的接头引物引发合成cDNA第一链，根据中间核心序列设计出上游引物，与3’引物扩增第一链cDNA，可得到全长cDNA的3’末端序列。5’RACE：先用oligo（dT）引发合成cDNA第一链，然后在第一链cDNA的3’端加上人工锚定序列，利用5’锚定引物及3’特异性引物进行扩增，得到全长cDNA的5‘末端序列。由含有oligo（dT）的接头引物引发合成第一链cDNA3'-RACE5’RACE5'-RACE