血糖含量的定量测定(Folin-Wu法)一、目的1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。2、学会制备无蛋白血滤液。3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应,Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。实验仪器1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡胶塞×3个；3、1mL胖肚吸管×1支；4、100mL锥形瓶×2个；漏斗架×1个；6、普通漏斗×2个；7、水浴锅×1个；8、电炉×1个；9、移液管1mL×2支;2mL×3支;5mL×2支;10mL×1支;10、滤纸×1盒；11、吸耳球×2个；12、7200型分光光度计×1台;表面皿×1个实验试剂1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。2、碱性硫酸铜溶液A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。5、酸性钼酸盐溶液：称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。实验步骤无蛋白血滤液的制备：氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。再加0.33mol/LH2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/LH2SO41-2滴）。用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。2、血糖的定量测定：1、取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。3、一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。六、实验结果样品A1（吸光度）标准液A0（吸光度）水（吸光度）10.1690.1300.00020.1900.1350.00030.1940.1280.000平均值0.1840.1310.000m=A1/A2*C*10*100m代表100ml全血中含血糖毫克数C0代表标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）A1代表样品液光吸收值A0代表标准液光吸收值所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153···约等于140.458mg。实验分析实验过程中哪些操作可能影响实验结果的准确性？在沉淀不完全时过滤，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管内壁，或有亚铜离子氧化成铜离子，比色测量时也可能会出现误差。2、实验中，血糖管有什么作用？可减少亚铜离子与空气的接触，防止氧化成铜离子。3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？流水冷却比较稳定，可以迅速降温。如不冷却会继续反应造成误差。