DNA的定量测定-二苯胺法目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。二、原理DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。三、实验仪器(1)试管(2)移液管(3)7220分光光度计四、实验试剂1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。贮于棕色瓶中。B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可五、实验步骤1.标准曲线的绘制取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：012345DNA标准液00.20.40.60.81.0蒸馏水1.00.80.60.40.20二苯胺试剂2.02.02.02.02.02.0加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。2.样品测定吸取DNA样液1ml，加入二苯胺溶液2.0ml,加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。实验结果12345样液吸光度0.0080.0230.070.0960.1110.095曲线绘制如下：DNA标准液浓度200ug/ml所以据图得到样液中DNA155.379微克。七、实验分析1、此方法测定DNA含量灵敏度不高,若是DNA含量低于50ug/ml,则难以测定。2、样品中少量的RNA并不影响测定,但是蛋白质,多糖及其衍生物,芳香醛,羟基醛等能与二苯胺反应成有机物,干扰DNA的定量。3、实验中加入乙醛的作用是什么，请详细说明？可以提高二苯胺法中DNA的发色量.减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰，提高灵敏度.