WESTERN+液体配方v1.pdf
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WESTERN液体配方v1.02005-11-8[常用buffer]1.PBS(1000mlPH7.4)KCl0.2gKH2PO40.2gNaCl8.0gNa2HPO4.2H2O1.15g加ddH2O定容至1000ml常温保存2.1×DHank’s(1000mlPH7.0~7.2)KCl0.4gNaCl8.00gNa2HPO4.12H2O0.156gKH2PO40.06gNaHCO30.35g(如需要可加酚红0.02g)加ddH2O至1000ml4oC保存6个月10×DHank’s(500ml)KCl2.00gNaCl4000gNa2HPO4.12H2O0.779gKH2PO40.30gNaHCO31.75g加ddH2O至500ml4oC保存6个月3.TBS(1000mlPH7.6)Trisbase(121.1)10mM1.211gNaCl(58.44)150mM8.766gddH2O800ml加浓盐酸约10-17滴调PH至7.6,定容至1000ml常温保存4.TBSTTBS临用加0.05%Tween20o4C保存15.电泳缓冲液(1000mlPH8.3)Trisbase3.03g甘氨酸14.4g:SDS粉末很轻,SDS1gK定容至1000ml称量时易被吸入口鼻腔4oC保存1周内,非常难受,操作时最好带口罩眼镜防护。6.电转缓冲液(1000mlPH8.3-8.4):甘氨酸、甲醇用Trisbase5.82gs甘氨酸2.93g量比较大,买大包装合SDS0.37g算甲醇200ml加ddH2O定容至1000ml4oC保存1周2[备用液]1.30%丙稀酰胺储备液(100ml)丙稀酰胺(acrylamide)有毒29.0gN,N’-甲叉双丙稀酰胺(N,N’-methylenebisacrylamide)有毒1.0gddH2O60ml37oC溶解(有的配方需要溶解18hr以上),定容至100ml,滤纸过滤棕色瓶4oC保存一个月(实践表明常温保存2~3个月亦可)2.分离胶缓冲液1.5MTris.HCl缓冲液PH8.8(100ml)Trisbase18.17gddH2O80ml搅拌混匀后,加入浓盐酸约3.5ml,调PH至8.8,定容至100ml4oC保存3.浓缩胶缓冲液1MTris.HCl缓冲液PH6.8(100ml)Trisbase12.11gddH2O70ml搅拌混匀后,加入浓盐酸约7ml,调PH至6.8,定容至100ml4oC保存4.10%SDS溶液(100ml)SDS(十二烷基黄酸钠)10gddH2O80ml68oC助溶,定容至100ml常温保存5.2×SDS上样缓冲液(loadingbuffer)0.5MTris.HClPH6.82.5mlSDS0.4gs:用2-ME更省钱DTT或2-ME(β巯基乙醇)0.31g/0.2ml甘油2ml溴酚蓝0.1mg加ddH2O定容至10ml分装1ml,100μl/支,-20oC保存6.5×SDS上样缓冲液(loadingbuffer)1MTris.HClPH6.8(60mmol/L)0.6ml10%SDS(2%)2mlDTT或2-ME(14.4mmol/L)?g/0.5ml甘油(25%)2.5ml1%溴酚蓝(0.1%)1ml加ddH2O定容至10ml分装1ml,100μl/支,-20oC保存37.丽春红染液丽春红S0.5g冰乙酸1mls:丽春红染液可回收加ddH2O定容至100ml重复使用。4[考染液]1.固定液(100ml)甲醇(methenol)50ml乙酸(aceticacid)10mlddH2O40ml室温保存2.考马斯亮兰染液R250(100ml)考马斯亮兰R2500.25g甲醇50ml乙酸10mlddH2O40ml过滤去除沉淀,4oC保存6个月3.脱色液(100ml)甲醇5ml乙酸7mlddH2O88ml室温保存5[现配现用液]1.10%APAP(过硫酸胺)易氧化不用表层AP0.0100g(10mg)ddH2O100μl配胶前配2.分离胶(5ml)单位ml凝胶浓度6%8%10%12%15%H2O2.62.31.91.61.130%丙稀酰胺溶液1.01.31.72.02.51.5MTris(PH8.8)1.31.31.31.31.310%SDS0.050.050.050.050.0510%AP0.050.050.050.050.