第三节、重要的酶类药物超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂，作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国已有产品。由于SOD能专一性去除超氧阴离子自由基，故引起国内外生化界和医药界的极大关注。目前临床上应用集中在自身免疫性疾病上如类风湿关节炎，红斑性狼疮，皮肌炎等稳定性对热稳定：天然牛血SOD可75℃加热数分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关对pH的稳定性：一般pH5.3~9.5较稳定，猪血SOD在pH7.6～9较稳定。吸收光谱结构特点：金属酶金属辅基与酶活性关系Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关;Cu与活性有关，对酶活力是必需的Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的（1）以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺（2）工艺过程：1）收集、浮选取新鲜牛血，离心除去血浆。2）溶血、去血红蛋白：干净红细胞加水溶血30min，然后加入0.25倍体积的乙醇和0.15倍体积的氯仿，搅拌15min，离心去血红蛋白，收集上清液。3）沉淀、热变性：将上述清液加入1.2～1.5倍体积的丙酮，产生大量絮状的沉淀，离心得沉淀物。再将沉淀物加适量水，离心去不溶物，上清液于60～70℃热处理10分钟，离心去沉淀得浅绿色得澄清液。4）柱层析、洗脱、超滤浓缩：将上述澄清液超滤浓缩后小心加到已用2.5mmol/L，pH7.6磷酸缓冲液平衡好的DEAE－sephadexA50柱上吸附，并用pH7.6的2.5～50mmol/L的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD活性的洗脱液。5）冷冻干燥（2）以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺二、胃蛋白酶（Pepsin）1、组成（结构）、性质胃中惟一的一种蛋白水解酶。其最适pH值为1～2。胃蛋白酶作用的主要部位是芳香族氨基酸或酸性氨基酸的氨基所组成的肽键。药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶，组织蛋白酶，胶原酶等，为粗制的酶制剂。性状：外观为淡黄色粉末2、生产工艺（1）工艺路线：（2）工艺过程：①自溶、过滤在夹层锅内预先加水100L及盐酸，加热至50℃时，加入200kg猪胃粘膜，快速搅拌使酸度均匀，保持45~48℃,消化3~4小时。用纱布滤去未消化的组织蛋白，收集滤液。②脱脂、去杂质将滤液降温至30℃以下，静防24~48h，使杂质沉淀除去，得到脱脂酶液。③浓缩干燥取脱脂酶液，在40℃以下浓缩到原体积的1/4，真空干燥，球磨，得到产品。三、尿激酶（Urokinase）1.组成性质（1）尿激酶有多种分子量形式，主要有31300、54700两种。尿中的尿胃蛋白酶原在酸性条件下可以激活生成尿胃蛋白酶，后者可以把分子量54700的天然尿激酶降解为分子量为31300尿激酶。（2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋白溶酶原是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于精氨酸－缬氨酸键使得纤溶酶原转为纤溶酶。（3）尿激酶的pI为pH8-9.2.生产工艺(1)工艺路线：（2）工艺过程：①收尿收集男性尿②沉淀处理尿液冷至10℃以下，用NaOH调pH至8.5,静置1h，虹吸上清液。用盐酸调至pH5.0~5.5。③硅藻土吸附处理好的尿液加入1%尿量的硅藻土，于5C下搅拌吸附1h。④洗脱硅藻土吸附物洗涤装柱，先用0.02%氨水加0.1mol/L氯化钠洗脱，当洗脱液油清变混时开始收集⑤除热源、去色素⑥CM－C浓缩⑦透析除盐四、L-天门冬酰胺酶（L-asparaginase）L-天门冬酰胺酶为白色结晶粉末，微有湿性，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙醛、苯等有机溶剂。对热稳定性好，在温度50℃下，15min后，活性降低30%，60℃下，1小时内失活。工艺路线：④提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入0.01mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37℃搅拌1.5h，30℃8mol/L醋酸调节pH4.2～4.4，压滤，滤液加入2倍体积的丙酮，放置3～4h过滤，收集沉淀，自然风干，得干粗酶.取粗制酶，加入0·3％甘氨酸，调节pH8.8搅拌1.5h离心，上清液60℃30min热处理。上清液加2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸缓冲液溶解，离心得上清酶溶液.⑤精制、冻干调节pH8.8离心弃去沉淀，清液再调pH7.7加入50％聚乙二醇，浓度达到16％。2～5℃放置4～5天，离心得沉淀。蒸馏水溶解加4倍量的丙酮沉淀，同法反复1次，pH6.4,0.05mol/L磷酸缓冲液溶解，50％聚乙二醇处理1次，即得无热原的L一天门冬酸胺酶。溶于0.8mol/L磷酸缓冲液，在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥制得注射用L一天门冬酸胺酶成品，每I支1万或2万单位。五、细胞色素C（CytochromeC）细胞色素