美国天使男孩大卫·威特1971年9月21日，他出生在美国德克萨斯州休斯敦市的圣鲁克医院1983年底，新任主治医生为“泡泡男孩”移植了姐姐凯瑟琳的骨髓干细胞手术后，凯瑟琳骨髓内潜伏的致命病毒就侵入了他的身体医生放弃了治疗，把“泡泡男孩”从禁锢了他12年的泡泡里抱了出来1984年2月22日，与病魔和孤独斗争了12年半的“泡泡男孩”享受着生命的尊严与自由，静静地离开了人世严重联合免疫缺陷病2004年12月27日，英国《柳叶刀》杂志报道，英国伦敦的医生近日用基因疗法为严重联合免疫缺陷儿童进行治疗获得成功4位患有严重联合免疫缺陷的儿童已被基因疗法治愈，使利用基因疗法治疗严重联合免疫缺陷的成功案例增加到了18例第九章基因治疗与反义药物第一节基因治疗概论一、基因治疗的概念p53二、基因治疗的方法1.基因增补基因治疗实例ADA-Gene+vector（逆转录病毒）重组分子患者TLyCIL-2刺激C分裂导入细胞生长分裂10天Gene表达回输患儿体内1~2月治疗一次,10个月患儿体内ADA水平达正常人的25%2.基因替换3.基因修复4.基因失活5.免疫基因的治疗黑色素瘤的基因治疗细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗6.自杀基因治疗“自杀基因”疗法“自杀基因”疗法“自杀基因”疗法“自杀基因”疗法7.耐药基因治疗三、基因治疗的途径1.exvivo乙型血友病逆转录病毒载体+FⅨcDNA重组体5`LTRFⅨneoSVPSOLTR3`①导入仓鼠细胞（CHO）→FⅨ表达；②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达；③91年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。是我国基因治疗成功的例子。2.invivo单纯疱疹病毒哺乳动物细胞HSVGene-TK（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）Gene—TKGCV（胸苷类似物,丙氧鸟苷）TdRPpGCV---p抑制DNA合成脱氧胸苷酸肿瘤细胞死亡邻近细胞死亡/凋亡（旁观者效应）第二节基因治疗的步骤和问题一、基因治疗的步骤基因治疗的步骤二、基因治疗中的问题第三节疾病的基因治疗一、基因治疗与肿瘤1.导入细胞因子基因进行治疗2.导入MHC的基因治疗MHC表达的抗原分为I类和II类I类抗原分子的正常功能是提供递呈抗原肿瘤细胞上I类抗原的MHC表达很弱或者不表达，使机体免疫应答不能发生导入MHC的I类抗原基因，可以诱导机体对肿瘤细胞的免疫应答，从而达到杀伤肿瘤细胞的目的3.导入抑癌基因的基因治疗p53基因p53基因的突变以点突变为主，基因重排和缺失很少见结肠、肺、膀胱、乳腺、干、食管、卵巢、皮肤等组织中p53基因的突变率非常高p53基因产物是393个P53蛋白将野生型的p53基因导入细胞进行表达，从而达到基因治疗的目的RB基因RB蛋白是一种DNA结合蛋白，调节多种与细胞周期增值有关基因的转录，并最终影响细胞周期的进程RB蛋白有磷酸化和非磷酸化两种形式，非磷酸化状态的RB蛋白为活性形式蛋白，具有抑制细胞增殖的功能成视网膜母细胞瘤中，30％是缺失了该基因，而有些病变的基因是发生了点突变4.自杀基因的治疗自杀基因+病毒载体转染重组载体自杀基因的作用机制尚不完全清楚，有可能是直接细胞毒性效应、旁观者效应、促进免疫反应等的综合结果直接细胞毒性是指高毒性的药物直接将肿瘤细胞杀死在前体药物存在的情况下，基因改造的肿瘤细胞能引起未经改造细胞的细胞毒性和死亡自杀基因／前体药物促发的免疫反应的原理目前也不分清楚二、基因治疗与艾滋病1.反义核酸2.核酶3.可溶性CD4分子的表达4.特异性抗体的诱导5.Tat蛋白突变体表达6.艾滋病疫苗第六节反义技术概论一、反义技术与反义核酸由于反义技术也是针对基因进行的治疗，所以反义药物从某种意义上讲，也是属于基因治疗的范畴狭义的基因治疗侧重于基因表达的上调性，而反义技术则侧重于基因表达的下调性二、反义核酸药物特点3）最优化的药物设计针对靶基因的序列进行简单的、理性化设计4）低毒、安全反义药物还没有发现有显著的毒性，最终都会被代谢掉5）制备简单核酸的合成容易，可以大规模生产，成本比较低三、反义技术的分类3.核酶核酶存在于生物细胞中，是一类具有催化活性的RNA分子，具有核酸酶的水解活性，可以特异性地剪切RNA分子4.三链形成寡核苷酸（TFO）三链形成寡聚核苷酸是指可与双链或单链DNA形成三股链，从而抑制基因转录的寡核苷酸5.肽核酸（PNAS）肽核酸是以肽为骨架的DNA类似物，是用手性不对称的中性肽链骨架置换脱氧核糖磷酸而成四、反义技术原理和方法一、反义脱氧核酸1.第一代――硫代寡聚核苷酸（PS-ODN