会计学/1、L-天门冬酰胺酶工艺(gōngyì)路线④提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入0.01mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37℃搅拌1.5h，30℃8mol/L醋酸调节pH4.2～4.4，压滤，滤液加入2倍体积的丙酮(bǐnɡtónɡ)，放置3～4h过滤，收集沉淀，自然风干，得干粗酶。取粗制酶，加入0·3％甘氨酸，调节pH8.8搅拌1.5h离心，上清液60℃30min热处理。上清液加2倍体积的丙酮(bǐnɡtónɡ)，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸缓冲液溶解，离心得上清酶溶液。⑤精制、冻干调节(tiáojié)pH8.8离心弃去沉淀，清液再调pH7.7加入50％聚乙二醇，浓度达到16％。2～5℃放置4～5天，离心得沉淀。蒸馏水溶解加4倍量的丙酮沉淀，同法反复1次，pH6.4,0.05mol/L磷酸缓冲液溶解，50％聚乙二醇处理1次，即得无热原的L一天门冬酸胺酶。溶于0.8mol/L磷酸缓冲液，在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥制得注射用L一天门冬酸胺酶成品，每I支1万或2万单位。二、细胞色素C生产工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物，适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切(yīqiè)症状。工艺过程①绞碎、提取、压滤取新鲜或冷冻猪心，去血块、脂肪和肌健等，绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉，加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀，用硫酸调pH4左右，常温搅拌提取压滤，滤液用氨水调节pH6.2，离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法重复提取1次，合并两次提取液。②中和、吸附、洗脱(xǐtuō)提取液加氨水中和至pH7.5，在冰箱中静止沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加入10g人造沸石，搅拌吸附40min，静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素C的人造沸石，用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤，然后装柱，用25％硫酸氨溶液洗脱(xǐtuō)，得洗脱(xǐtuō)液。③盐析、浓缩、透析洗脱液加入固体硫酸镀达到45％饱和度，使杂蛋白析出，过滤。收集透明(tòumíng)滤液，缓缓加入20％三氯醋酸，边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出，离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，透析至无硫酸根为止，过滤得细胞色素C粗品溶液。④吸附、洗脱、透析粗品溶液通过处理好的AmberiteIRC－50（NH4＋）树脂柱吸附，然后将树脂移入大烧杯中，水洗至澄清为止，再分别上柱，用0·6mol/L磷酸氢二钠与0.4mol/L氯化钠混合液洗脱，洗脱液用蒸馏水透析去氯离子，得细胞色素C精品溶液。⑤制剂取含相当于1.5g的细胞色素C精品液，加200mg亚硫酸氢钠，搅拌溶解再加双甘肽1.5g混合均匀，用氢氧化钠调节pH6.4左右，加注射用水100ml，过滤除热原，6号垂溶漏斗(lòudǒu)过滤，测含量，灌注，冷冻干燥，即得每支含15mg细胞色素C的制剂。