第31卷笫3期河南师范大学学报(自然科学版)．31No．32003年8月JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScience)Aug．2003文章编号：100O一2367(2003)03-0066一O6现代生物技术在水产动物健康养殖中的应用孔祥会h。，王桂忠，李少菁(1．厦门大学海洋学系亚热带海洋研究所，福建厦门361005；2．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453002)摘要：现代生物技术的应用对水产动物健康养殖产生了很大的影响．本文从水产动物疾病诊断，高效疫苗制备，抗病品种培育，提高抗病力，水体污染监测等方面对现代生物技术的应用进行了综述．旨在为水产动物健康养殖及相关研究提供参考．关键词：现代生物技术；水产动物；健康养殖；应用中图分类号：Q789文献标识码：A随着人们生活水平的提高，对水产品的需求已经从数量型转向质量型，优质健康的水产品日益得到人们的青睐．优质高产是今后渔业的发展方向．无病无伤，体色鲜艳的健康水产品才能满足市场的需求．传统的养殖模式由于水产动物发病时大量使用氯制剂、硫酸铜和孔雀石绿等药物，结果由于残毒影响，很难生产出健康的水产品．近几年来现代生物技术在水产养殖业上的运用和发展为水产动物的健康养殖揭开了新的篇章．1水产动物微生物病原体的检测分子生物学方法出现之前，水产动物微生物疾病的诊断主要依赖于组织细胞培养，病原体表型鉴定，血清学分析或组织病理学检查．微生物疾病病原体鉴定过程复杂，耗费时间较长．而其发生和传播又非常快．往往由于不能现场鉴定和及时治疗，造成经济重大损失．分子生物学技术的出现为微生物病原体的鉴定提供了直接的方法，简化了诊断的时程，使水产动物疾病诊断发生了根本性的变革[1]．分子生物学诊断在检测病原体方面之所以具有独到的优越性，是因为它检测灵敏度较高，不需要体外培养．通过检测遗传多态性或者基因突变来确定和鉴别病原，多态性鉴别灵敏度较高，不同种类和品系的单个核苷酸插入，删除，突变均可检测．目前在水产动物病原体诊断上常用的分子生物学方法有限制性酶切，探针杂交和PCR等．1．1限制性酶切(Restrictionenzymedigestion)检测限制性酶可识别DNA上较短的序列，在识别位点上切开DNA，单个核苷酸变化即可导致限制性酶切位点的增加或缺失，因此，酶切后产生的片段数目发生了改变，即所谓的限制性片段长度多态性(Restrictionlengthpolymorphisms，RFLP)．然后进行凝胶电泳，酶切后的DNA片段根据大小在凝胶电泳上进行分离，染色后即可观察各个不同的片段，进行遗传变异的分析．不同样品总DNA酶切后即可产生限制性酶切多态性．然而检测这些多态性差异时，需要使用标记的DNA探针来加以确定[3]．另一种方法可以不需要DNA探针杂交，首先对DNA片段进行限制性酶切，然后靶定DNA特定片段，通过PCR扩增，来显示限制性片段多态性，即所谓的扩增片段长度多态性(Amplificationfragmentlengthpolymorphisms，AFLP)c引．对病收稿日期：2002—12—18资金项目：国家863重大专项(2002AA603013)作者简介：孔祥会(1968~)，男，河南虞城人，河南师范大学讲师，厦门大学博士生．主要研究方向为水生动物生理生化及健康养殖．第3期孔祥会等：现代生物技术在水产动物健康养殖中的应用67原微生物而言，这种诊断是相当有用而直接的方法[3]．也可以鉴别特定的寄生虫[7]．Chang，Y．S．etal(2001)从美国三个不同的海岸水体(NewYork，NewJersey，andTexas)收集的蓝蟹(Callinectessapidus)，通过PCR和原位杂交分析两步诊断证实存在白斑综合症病毒(whitespotsyndromevirus，WssV)．通过RFLP方法，对于一个1156bp片段的WSSVrrl-specificRsaI进行扩增，从而区别NewJersey蓝蟹WSSV和其它地方分离的WSSVL9]．1．2探针杂交(Probes，Hybridisation)检测特异性的核酸探针杂交是鉴定病原体十分有效的方法，探针可用来检测和确定病原体特定序列，甚至被其它核苷酸片段污染的样品也可检测．然而探针的设计及杂交的条件要求严格，主要目的是确保探针和样品中互补核酸序列特异性结合．关于核酸探针的标记和检测系统的多样性，Tijssen，P．(1993)进行了综述[1。。．目前常用的标记有半抗原诸如生物素或地高辛[11]和荧光标记[1．标记和检测方法多样性能够提供适宜的系统进行点印迹或原位