酶活性的测定学习教案.pptx
上传人:王子****青蛙 上传时间:2024-09-13 格式:PPTX 页数:30 大小:203KB 金币:10 举报 版权申诉
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会计学二、材料(cáiliào)和设备三、实验(shíyàn)步骤2、过氧化物酶活性的测定酶活性测定的反应(fǎnyìng)体系包括:2.9ml0.05mol/L磷酸缓冲液、1.0ml2%H2O2、1.0ml0.05mol/L愈创木酚和0.1ml酶液。以在沸水中加热5min的酶液为对照,做二组重复实验。反应(fǎnyìng)体系加入酶液后,立即于37℃水浴中保温15min,然后迅速转入冰浴中,并加入2.0ml20%三氯乙酸终止反应(fǎnyìng)。然后,过滤(或5000g离心10min),滤液适当稀释,用751型分光光度计在470nm波长下测定反应(fǎnyìng)体系的吸光度。四、实验(shíyàn)结果CAT过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶活性测定方法过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶的应用:过氧化氢(ɡuòyǎnɡhuàqīnɡ)酶的测定:高锰酸钾(ɡāoměnɡsuānjiǎ)滴定法:方法比较(bǐjiào):研究认为,化学滴定法重复性差、紧密度低、操作繁琐、检测线低,不适于大批量的样品测定。其优点是不需要任何特殊的仪器,适用性比较(bǐjiào)广泛。紫外分光光度法具有重现性好,操作简单、快速、检测线相对较低得到优点。但是对于测定底物或产物改变量方面不太准确。总结(zǒngjié):抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定(cèdìng)——在茶叶中实验(shíyàn)原理APX酶液的制备(zhìbèi)APX活性的测定(cèdìng)计算公式测定(cèdìng)茶树鲜叶APX活性的最佳条件注意事项:超氧化物(chāoyǎnɡhuàwù)歧化酶(SOD)的活性测定黄嘌呤氧化酶法实验试剂:硫酸盐缓冲液,盐酸(yánsuān)羟胺,黄嘌呤,黄嘌呤氧化酶,醋酸等。实验(shíyàn)步骤:计算方法:邻苯三酚自氧化(yǎnghuà)法1.试剂:0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2内含2mmol/LEDTA)0.2mol/L(Tris)三羟甲基氨基(ānjī)甲烷(内含4mmol/L乙二胺四乙酸EDTA)100ml与0.2mol/LHCl44.76ml混合加双蒸水至200ml调pH8.2±0.01;邻苯三酚(45mmol/L)以10mmol/LHCl配制成6mmol/L溶液存放于冰箱备用。2.仪器:紫外分光光度计,酸度计,恒温水浴锅实验(shíyàn)步骤:.SOD活性测定:将样液加入到Tris缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。活力单位定义:将一定(yīdìng)条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位(u)。