酶的制备及活力测定学习教案.pptx
上传人:王子****青蛙 上传时间:2024-09-13 格式:PPTX 页数:34 大小:2.1MB 金币:10 举报 版权申诉
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会计学课程标准1.研究酶的存在和简单制作方法。2.尝试利用酶活力测定的一般原理和方法。课标解读(jiědú)1.了解酶的合成、作用与分布。2.理解提取和制备酶的简单方法。3.掌握酶活力测定的一般原理、方法及影响因素。(1)酶的合成酶是在生物(shēngwù)体_______中合成的。(2)酶的分布多数酶在_______直接参与生物(shēngwù)化学反应,少数的酶要分泌到_______发挥作用。(3)酶的提取(tíqǔ)提取(tíqǔ)细胞内的酶,可用_______、_______或_______等机械将组织细胞破碎,经_____、_____制备成粗酶液;提取(tíqǔ)分泌到细胞外的酶,如___________、_________等,可以直接从动物_______或细胞外的_________中提取(tíqǔ)。(1)酶活力的表示方法酶的活力通常以单位时间内_____________或者在单位时间内_____________来表示。(2)测定酶活力原因在提取(tíqǔ)过程中,_____________等多种环境条件都可能影响酶的_________,导致酶_____,直至丧失_____。1.酶的分布(fēnbù)与提取分光(fēnɡuānɡ)光度法是通过直接测定溶质对光的吸收能力来确定溶液浓度的方法。测定过程如下:①配制梯度浓度标准溶液;②测出标准溶液的吸光值:在分光(fēnɡuānɡ)光度计上,选取特定的波长,测出上述各溶液的吸光值;③绘制标准曲线:以各种标准溶液的浓度为横坐标,相应的吸光值为纵坐标,在方格坐标纸上绘制标准曲线;④测定待测样品的吸光值;⑤查找浓度,计算物质的含量:根据测出的吸光值,在标准曲线上查找它的对应浓度,计算待测物质的含量。下列各项能表示酶活性高低的是()。A.单位时间、单位体积内反应物的总量B.一段时间后生成物的总量C.一段时间后,一定体积中消耗的反应物的量D.单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物(chǎnwù)的增加量解析酶活性的高低可以用在一定条件下,酶所催化的某一化学反应的反应速率表示,而酶反应速率是指单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物(chǎnwù)的增加量。答案D植物淀粉酶的制备及活力测定(1)提取(tíqǔ)酶液:称取2g萌发的_____种子,加1g_______,研磨成匀浆,倒入25mL的_________中,加_______稀释定容至25mL,在_____下放置15~20min,然后以3000r/min离心5min,取出上清液(内含淀粉酶)。将其中一部分上清液在_______________,使酶失活。(2)滴加酶液:取4支试管,编号1、2、3、4。向1、2号试管中各加入__________________1mL;向3、4号试管中加入_________________1mL。(3)恒温处理:将4支试管_____放入___℃恒温水浴锅中保温15min,再向各试管分别加入___℃下预热的质量分数为1%的淀粉溶液2mL,摇匀后立即放入___℃水浴中保温5min。(4)钝化处理:取出试管,向各试管同时加入4mL0.4mol/L的质量浓度为0.4mol/L__________4mL,以钝化___________,使反应_____。(5)测定吸光值:从4支试管中各取2mL溶液,分别放入25mL具塞_________中,再加入2mL__________________试剂,混匀、煮沸、冷却(lěngquè)后用蒸馏水稀释至25mL混匀。分别移入4支_______,用___________在波长____nm处进行_____,记录_______并记算平均值。(6)绘制(huìzhì)_________。(7)查找_______含量。(8)计算淀粉酶的活力。1.酶的制备(zhìbèi)(1)原理淀粉酶活力的大小与产生(chǎnshēng)的麦芽糖的量成正比。麦芽糖与3,5­二硝基水杨酸试剂反应,生成黄褐色产物。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线,用分光光度法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的麦芽糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。(2)活动程序①提取酶液②滴加酶液③恒温处理(注意保温温度和时间)④钝化处理:用0.4mol/LNaOH处理。⑤测定(cèdìng)吸光值(注意加入的试剂以及呈现的颜色)。⑥绘制标准曲线(用分光光度计在波长520nm处进行比色,记录吸光值,以吸光值为纵坐标、麦芽糖含量为横坐标,绘制标准曲线(其中0.0mL管为空白对照)。式中:A为淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(在标准曲线上查得,mg);A′为淀粉酶的对照管中的麦芽糖量(mg);V为比色时所