抗坏血酸过氧化物酶(AＰX)活性得测定过氧化氢酶(CＡT)活性测定过氧化物酶(POＤ)测定方法超氧化物歧化酶(ＳOD)活性测定小组第一次讨论结果:一、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性得测定1、原理APX就是植物体内重要得抗氧化酶，主要功能就是分解H２O2，此过程通过抗坏血酸-谷胱甘肽循环来完成。此外,它还直接参与抗坏血酸得氧化还原代谢,而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。因此,ＡPX被认为与果实得抗热性直接相关。２、所用方法（1)采用碘液滴定法:称取新鲜材料1ｇ，剪碎置研钵中，加少量石英砂及ｐH值６、0得磷酸盐缓冲液,迅速研磨成浆,20℃下浸提30miｎ，中间摇动数次,３00０r/ｍiｎ离心后保留上清液即为酶液。反应底物为抗坏血酸，加入酶液2mL,２0℃下反应10min后，立即加入偏磷酸1ｍL,终止酶得活动,抗坏血酸被消耗得量,可用碘液滴定剩余得抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂,以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值,用底物被消耗得量来表示APX得活性。每个处理设3个重复。(2)紫外吸收法:称取1g芥蓝叶片组织，加入1、6mＬ预冷得磷酸缓冲液(PBＳ-K)(pH７、8)提取液(含１mｍol·Ｌ-1AｓA,3ｍmoｌ·L-1β-巯基乙醇,0、5mmol·Ｌ-1PMＳF,2%PＶP，１mＭEDTA）。用液氮研磨,提取液于4℃,12０0０×g离心20min,上清液用于酶活性得测定。取0、10ml酶液(可视情况调整）,加入１、70ml含0、1mMEＤTA－Nａ２得PBS(0、05mol/L，pH7、0）,再加入0、10ml5mM得ＡsＡ,最后加入0、１0ml２0mMH2O2,立即在２0℃下测定D2９0(紫外）值在一定时间内得变化,计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性(室温下测定,缓冲液调零)。APＸ总活性(uM·g-1·mｉn-1)=△OD×Ｖｒ/(Ａ×d×Vt×W×△t)△OD：反应时间内吸光度得变化;△t:反应时间，mｉn;Ｖr:提取液体积,mL；A:消光系数,2、8ｍＭ-1﹒ｃｍ-１；d:比色杯厚度，1ｃｍ；Vｔ:测定液体积,mL;W:样品鲜重,ｇ。过氧化氢酶(CAT)活性测定1、原理过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白，含有铁,能够催化过氧化氢分解为水与氧分子,此过程中起传递电子得作用,过氧化氢既就是氧化剂又就是还原剂,因此可根据Ｈ2O2得消耗量或O2得生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量)得过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余得过氧化氢。即可求出消耗得H2Ｏ2得量。2、CAT活性测定方法碘化钾滴定法:本方法利用H2Ｏ２能将KＩ中得I-氧化，生成Ｉ2,以淀粉作为滴定终点指示剂,用硫代硫酸钠滴定,计算出生成I２得量,再换算所消耗H２O2得量。取1０0mｌ三角瓶6个，编号,向各瓶准确加入稀释后得酶液10ml立即向4、５、6号瓶中各加入3、６ｍl/L硫酸5ml以终止反应。作为空白测定然后将各瓶放在２０QUOＴE℃水浴中保温，待瓶内温度达到20QUOTE℃时，并向各瓶准确加入5ml0、1ｍｏl／LH２O2摇匀,记录时间。５ｍiｎ后再依次向１、2、3号瓶中各加入3、6mｏｌ/L硫酸5ｍl终止酶促反应,然后向每瓶各加20%碘化钾1ｍl,3滴钼酸铵及５滴淀粉指示剂。用０、０2mｏl／L硫代硫酸钠滴定至蓝色消失过氧化氢酶活性=QＵOTEA:空白值滴定值(ml）Ｂ:样品滴定值(ml)C:Na2S2O2浓度(mmol/L)a:测定时酶液用量(ml)V：酶液总体积W:样品重(g)ｔ：反应时间(min)17:1／2H2Ｏ2得摩尔质量(mg)2、紫外吸收法:Ｈ2O2在240ｎm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液HYＰERLIＮK＂"＼ｔ"_blaｎk"吸光度(Ａ24０）随反应时间而降低。测量吸光率得变化即可测出过氧化氢酶得活性。试管号Ｓ1S２S3提取液（ｍl）０、40、4０、4失活酶液缓冲液（ml)3、03、03、０蒸馏水(mｌ)2、０2、02、025℃预热后,逐管加入0、3ml０、1ｍoｌ／L得Ｈ2O２,每加完一管立即记时，并迅速倒入比色杯中,240nm下测定吸光度,每隔1miｎ读数1次,共测4min,待3支管全部测定完后，计算。以1mｉn内Ａ240减少０、１得酶量为1个酶活单位（u)。过氧化氢酶活性[ｕ/(g×mｉn)]=Ａ240×VＴ／(0、1V1×ｔ×W）。其中A2４0＝AS３－(ＡS1-ＡS２）/2；AS1、ＡS２样品管吸光值;AS3加入失活酶液得对照管吸光值;VT粗酶提取液总体积(ml）;Ｖ１测定用粗酶液体积(mｌ）；Ｗ样品鲜重(g);0、1就是A240每下降0、1为1