会计学概述(ɡàishù)酶联免疫吸附试验(shìyàn)(ELISA)3.竞争法Ag※Ag※Ab+AbAg(标本(biāoběn))(定量)AgAb二、反应条件(tiáojiàn)的选择酶标二抗浓度：100ug/LIgG，加稀释的酶标二抗，取OD=0.8者。包被Ag或Ab浓度：棋盘滴定法3.温度、时间等三、操作标准化1加样2保温3洗涤4比色四、影响ELISA测定的因素：试剂盒因素实验(shíyàn)操作中的影响试剂盒因素：A固相材料：孔间不均B抗原或抗体：纯化(天然但干扰多)、合成(多肽分子较小，常有空间位阻)和基因抗原(与片段的选择和制备水平有关)C酶结合物D色原底物(dǐwù)：OPD:致Ca，不稳定(避光)TMB：水溶性差(商品：配好)E运输储存操作中的注意事项：1标本的收集和保存试剂(shìjì)的准备加样温育洗板显色比色结果判断样品的收集和保存：1.溶血标本可增加非特异性显色(Hb作用于HRP的辅基)。2.细菌污染(wūrǎn)标本因菌体内源性酶而假“-”(破坏Ag或Ab)或假“+”(非特异蛋白)。3.反复冻融可使抗体效价下降而假“-”。4.陈旧标本可使IgG聚集，引起间接法本底增加。5.标本用NaN3防腐，可出现假“-”。试剂的准备(zhǔnbèi)：注意不同地区冬、夏温差，可造成达到37℃的时间差异，对弱阳性结果有很大影响。加样：总体积约360ul，包被和封闭均为100ul，未封闭部分(bùfen)可吸附非特异蛋白温育：4℃过夜最佳，37℃2h较好，43℃20min可造成(zàochénɡ)弱“+”假“-”2水浴较温箱等空气浴均匀洗板：手洗效果(xiàoguǒ)最佳自动洗板要注意残留液量。显色(xiǎnsè)对HRP，显色(xiǎnsè)完全需30min,15min只达80%,易造成弱“+”假“-”比色：单波长(bōcháng)比色需设空白孔：OD=OD样品-OD空白双波长(bōcháng)比色不需设空白：OD=OD450nm-OD630nm结果判断(pànduàn)：1注意夹心法假“-”2用cut-off(CO)值判断(pànduàn)3“灰区”时建议动态观察4结合临床用药：例如抑制剂对HBsAg