实验1细胞融合操作与观察一、实验目的在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。细胞融合的意义马铃薯和番茄通过细胞融合得到了至今有性杂交未能获得的属间杂种薯番茄和番茄薯；白菜和甘蓝通过细胞融合得到白菜—甘蓝。细胞融合方式很多种类的病毒能介导细胞融合,如仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒、牛痘病毒等，其中仙台病毒最常用。这类病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒与宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞融合。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养。缺点：病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰。方式二：化学诱导融合20世纪80年代建立起来的电融合技术，是将两种细胞的混合液置于低压交流电场中，细胞极化成偶极子，排列成串珠状，然后施加瞬间强脉冲，使质膜发生可逆性电击穿，从而导致融合。具有融合的频率高，具有对细胞无毒害作用、操作简便、作用机制明确、可重复性好等优点，但难以控制一对细胞的融合。聚乙二醇法的原理影响融合率的因素三、细胞融合的应用器具:显微镜、离心机、离心管、细滴管、载片、盖片2.试剂:Alsever液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.8g，NaCl0.42g，加重蒸水至100mL。GKN液：NaCl8g，KCl0.4g，Na2HPO4.2H2O1.77g，NaH2PO4.2H2O0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1L重蒸水中。0.85%NaCl液50%聚乙二醇(PEG)：称取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度试管，在酒精灯火或沸水中加热溶化。待冷至50℃时，加入等体积并预热至50℃的GKN液混匀。在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸭血细胞膜融合在一起，形成一个融合细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸭血细胞。融合率的计算细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构，它可选择性地让某些物质进出细胞。而对于不同性质的物质，细胞膜的通透性是大不一样的。当细胞与所处的环境存在渗透压差别时，水分子可从渗透压低的一侧向高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，细胞会失水而皱缩；而在低渗环境中，细胞会吸水膨胀直至破裂。记录分析兔红细胞渗透压变化引起的细胞形态变化及溶血情况。