会计学第二节不可逆抑制作用一.非专一性的不可逆抑制作用:1.概念:2.非专一性的不可逆抑制剂酰化试剂:(酸酐(suāngān),乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基异脲)--NH2－NH－CO-RR-CO-X+E---OHE-－O－CO-R+HX--C6H5-OH－C6H5-O－CO-R--SH－S－CO-R烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸(yǐsuān),碘代乙酰胺等)-NH3-NH-R-SH-S-RR-X+E-COOHE－-COOR+HX-S-CH3-S(CH3)-R咪唑基NH-咪唑基N-R含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺(NEMI)、丙烯腈等亲电试剂:(四硝基甲烷(jiǎwán)(TNM)氧化剂:H2O2,NBS等作用-SH、Trp、吲哚基等还原剂:ME,DTT等,作用-S-S-、二、专一性不可逆抑制剂:（一）Ks型不可逆抑制剂:1.概念2.抑制机理E+IEIEIn判断Ks型抑制剂作用是否发生(fāshēng)在活性部位方法:化学定量法.底物、竞争性抑制剂保护方法酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况（二）Kcat型不可逆抑制动力学概念:自杀性底物(dǐwù)例如中E.coli中-羟基葵酰硫酯脱水酶CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-RR=-CH2-CH2-NH-CO-CH3CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R(-反式双键)CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R(,顺式双键)Kcat型抑制剂:3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺CH3-(CH2)5-CC-CH2-CO-S-RECH3-(CH2)5HC=C=CH-CO-SRCH3(CH2)5HC=C-CH2-CO-SR不可逆共价(ɡònɡjià)结合第三节可逆抑制作用的动力学:可逆抑制作用:ReversibleInhibition1.概念2.类型(lèixíng):竞争性抑制:Comp.CCompetitiveinhibition非竞争性抑制NonC.NCNon-Competitive反竞争性抑制UnC.UCUn-Competitive混合型抑制MTMixedTypeinhibition一、竞争性抑制作用动力学模型(móxíng)图:竞争性抑制作用动力学方程(fāngchéng)推导：酶形式矢量图动力学项Ek-1k-3+k-3k2ESk1k-3[S]EIk-1k3[I]+k2k3[I]/动力学模型:动力学方程：式中Vm=k2[E]o不变Km为米氏常数(chángshù)Kmapp表观米氏常数(chángshù)，增大KI为抑制常数(chángshù)双倒数作图法：抑制常数(chángshù)：KI的求法：以Kmapp对[I]作图，横轴截距为-KI抑制率i%=(1-vi/vo)100%i%与[S]有关,[S]i%二、非竞争性抑制作用动力学:动力学模型:动力学方程：Vm=k2[E]oVmapp为表观最大速度(sùdù)，减小Km为米氏常数，不变。KI为抑制常数双倒数作图法：抑制(yìzhì)常数：KI的求法：以1/Vmapp对[I]作图，横轴截距为-KI抑制(yìzhì)率:i%与[S]无关,三、反竞争性抑制作用动力学:动力学模型(móxíng):动力学方程：Vmapp为表观最大速度，减小Kmapp为表观米氏常数，减小KI为抑制常数双倒数(dǎoshù)作图法：抑制常数：KI的求法：以1/Vmapp对[I]作图，横轴截距为-KI抑制率:i%与[S]有关,[S]i%四、混合型抑制作用动力学:动力学模型:动力学方程：Vmapp为表观(biǎoɡuān)最大速度，减小Kmapp为表观(biǎoɡuān)米氏常数，当KI<KISKm增大,KI>KISKm减小双倒数作图法：抑制(yìzhì)常数：KI、KIS的求法：以斜率对[I]作图，横轴截距为－KI以1/Vmapp对[I]作图，横轴截距为-KIS第四节四种(sìzhǒnɡ)可逆抑制作用的动力学比较非竞争性：NC:KI=KIS反竞争性UC:KI混合型抑制剂：MT:KI=KISpOXLp7v0djZKylHSJr3WxBmHK6NJ2GhiBeFZ7R4I30kA1DkaGhn3XtKknBYCUDxqA7FHYi2CHhI92tgKQcWA3PtGZ7R4I30kA1DkaGhn3