造血干细胞定向分化扩增和移植追溯干细胞的发现史干细胞(stemcell,SC)研究胚胎干细胞(embryonicstemcell，EC)成体干细胞(somaticstemcell)：unipotent（单能）:somaticSCWherewefindsomaticSC?Somaticstemcells:Haematopoieticstemcells(HSCs)诱导性多功能干细胞(inducedpluripotentstemcell，iPS)adultcell干细胞的端粒酶（telomerase）干细胞的应用我国建成世界最大人胚胎干细胞库替换那些因病“下岗”的细胞修复那些“过劳死”的组织起到“全能修理工”的作用目前,除造血干细胞移植被作为成熟技术应用于临床治疗外，其他干细胞移植技术尚处在临床研究阶段。造血干细胞作为干细胞研究与应用的突破口TheNobelPrize,1990E.DonnallThomas什么是造血干细胞移植？(HeamatopoieticStemCellTransplantation，HSCT)一、按细胞来源1骨髓移植（bonemarrowtransplantation，BMT）通过多点骨髓腔穿刺，抽吸含HSC的骨髓血混合液，是经典的移植方法，效果可靠。但采髓需在全麻或硬膜外麻醉下进行，通常需采集骨髓混合液600-1000ml，具体数值随患者体重来定,但GVHD(graftversushostdisease)发生。包括自体BMT（autologousBMT，ABMT）同基因BMT（syngeneicBMT，syn-BMT）异基因BMT（allogeneicBMT，allo-BMT）2外周血干细胞移植(peripheralbloodstemcelltransplantation,PBSCT)使用药物和细胞因子动员,促使HSC从骨髓释放到外周血，然后通过血细胞分离机从循环血中收集HSC。与BMT相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血细胞恢复快，而GVHD发生率和严重程度并无明显增加等优点。包括自体PBSCT（autologousAPBSCT）异体PBSCT(allogeneicPBSCT,allo-PBSCT)3脐带血干细胞移植(Umbilicalcordbloodstemcelltransplantation，UCBSCT)胎儿脐带血和胎盘中含有大量造血干细胞，且免疫原性不成熟，在同胞兄妹中HLA配型不完全相合者也能植活，不过无关供者脐血干细胞移植仍需要作HLA配型。与BMT及PBSCT相比，脐带血干细胞具有异体排斥反应小，免疫原性低，再生能力和速度是前者的10到20倍，受病毒感染的风险低等特点。什么是造血干细胞？HeamatopoieticStemCell，HSC祖/定向干CHSC,haematopoieticstemcell;CLP,commonlymphoidprogenitor;CMP,commonmyeloidprogenitor.第一节造血干/祖细胞的生物学特性外周血造血干/祖细胞物理特性CD34+(最广泛的HSC的表面标志)AC133＋（细胞表面糖蛋白）c-kit(CD117）+（SCFR,造血干细胞因子受体）Flt3(CD135）+KDR+（Vascularendothelialgrowthfactorreecptor2，VEGFR2)CD38－CD33-Thy-1-（CD90low）（胸腺细胞表面抗原标志）CD71－HLA-DR－（与细胞增殖有关）MCD45RAlowLin－(已分化为特定细胞的标记)Rh123lowHO33342low外周血造血干/祖细胞功能特性29集落形成的关键是培养体系（细胞因子和血清等）CFU-GM和总CFC常用作评估外周血移植物质量的指标骨髓象分析第二节造血干细胞的动员、采集、处理一.外周血造血干/祖细胞动员动员剂将造血干细胞动员到外周血。化疗药物:反馈性造血增生。造血细胞因子:刺激造血细胞增殖及向髓外转移。动员前:PBCD34+0.1-0.2%，动员后：1-2%具体方案大剂量单一化疗药物：CTX(cytoxan,环磷酰胺)-4g-7g/m2VP16(etoposide，依托泊苷)-2g/m2Melphalan（马法兰）-140mg/(m2,d1-2)联合化疗CTX4g/m2,VP16600mg/m2（三）造血因子的使用（四）化疗与造血因子联合二外周血造血干/祖细胞采集血细胞分离机：全自动、全封闭、连续和不连续、间歇的血细胞分离机。如CS3000plus每天一次，每次10L全血，可连续2-3次1采集的细胞数3处理四解冻与回输第三节CD34+细胞的分选一CD3