一、研究目的与意义二、研究思路与实验设计二、研究思路与实验设计二、研究思路与实验设计样地设置：为测定不同沼液施加量对橡胶林土壤微生物的影响，选择生长相对一致、林龄一致、排胶正常的橡胶树作为研究对象。试验设6个不同沼液施加量梯度试验小区，每个小区面积为15×26m2，小区内橡胶树行距3m×6.5m，每个小区内含橡胶树30株，小区之间采取随机区组排列。小区间设置1m宽保护带，深度为1.5m，埋设油毡，以隔离根系，防止施肥后的相互影响。2.5样品的测定指标与方法2.5样品的测定指标与方法固相萃取（SolidPhaseExtraction）就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。沼液中抗生素的提取：1.将沼液用离心机6000rpm，离心5分钟。2.过滤后将上清液过5mm滤纸，得滤液A。3.将滤液A用离心机8000rpm，离心10分钟。4.过滤后将上清液过0.45μm滤纸，得滤液B。5.活化滤柱，大约2-3小时。6.高压真空过滤柱，大约5-6小时。7.洗脱液洗脱滤柱上的样本。8.送检。土壤中抗生素的提取：1.采样后24小时内放入低温烘箱，处理24--48小时。2.研磨、过筛，封袋后立即开始处理。3.称取3g土样，每组设3个平行对照。4.各试管加10ml柠檬酸和10ml乙腈。5.涡旋1Min，超声15Min，4000rpm离心10分钟。6.重复4、5两次。7.装入200ml的旋转蒸发瓶中。8.55℃旋转蒸发。9.再用超纯水稀释至200ml。10.SAX去除腐殖质。11.进行水样处理的相同步骤。三、研究的主要内容②.施用不同浓度沼液的土壤抗生素对土壤微生物数量变化的影响。预计要检测的抗生素为：土霉素、泰乐菌素、磺胺二甲嘧啶、恩诺沙星。研究内容：分析施用不同浓度沼液的土壤中土霉素、泰乐菌素、磺胺二甲嘧啶、恩诺沙星的变化。预期成果：通过以上抗生素含量的变化，结合土壤微生物生物量碳(MBC)的变化，分析施用不同浓度沼液的土壤抗生素影响土壤微生物数量的主要因素。*大部分抗生素均有靶标微生物，其会抑制靶标微生物的生物活性，从而使其他微生物获得土壤中大量资源，进而得以增殖，从而改变了土壤微生物的群落结构。③.施用不同浓度沼液的土壤活性酶与微生物数量变化的联系。测定指标：脲酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶、磷酸酶。研究内容：分析施用不同浓度的沼液其土壤酶活性的影响。预期成果：探究沼液施用量与土壤酶活性的关联，并揭示施用不同浓度的沼液其土壤活性酶影响土壤微生物数量的主要原因。得到以上数据后，输入到Excel当中，应用SAS10.0软件对数据进行方差分析、逐步线性回归分析和通径分析。利用逐步回归分析和通径分析评价不同因子与微生物间的相关关系。通过对物理、化学指标的探究，结合与生物学方面数据的比对、分析，探讨不同浓度沼液施入到橡胶林后，土壤微生物发生的一系列变化，以期得到海南岛橡胶林消纳沼液的合理阈值。THANKS