会计学细胞融合单克隆抗体技术第一节细胞融合一、细胞融合剂二、细胞融合方式三、细胞融合技术四、杂种细胞的筛选第一节细胞融合第一节细胞融合一、细胞融合剂二、细胞融合方式三、细胞融合技术生物法化学法：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合影响因素：原理：细胞在电场中极化成偶极子，并排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜。/甜菜原生质体电融合过程注意事项优点：原理：两种亲本细胞融合混合物中可有多种类型细胞，筛选目的是获得优良杂种细胞。同核体异核体多核体异胞质体核质体1植物细胞筛选方式2）抗性互补筛选法如：亲本1：放线菌素D＋，MS－亲本2：放线菌素D－，MS＋杂种细胞：放线菌素D＋，MS＋而亲本和其它细胞死亡3）利用物理特性筛选法亲本1：异硫氰酸荧光素（FITC）标记亲本2：碱性蕊香红荧光素标记荧光显微镜下，亲本1：绿色，亲本2：红色，杂种细胞可以区分4）利用生长特性筛选法如粉兰烟草与朗氏烟草细胞：外源激素融合细胞：内源激素动物细胞的筛选方式：2）营养互补筛选系统亲本A：色氨酸缺陷型亲本B：苏氨酸缺陷型杂种细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培养基上培养，亲本细胞均死亡。3）温度敏感突变型亲本一：Kan＋，37度亲本二：高温敏感突变型，Kan－杂种细胞能在高温和含Kan培养基生长。第二节单克隆抗体一、抗体的结构与功能二、单克隆抗体的制备和生产三、单克隆抗体的改造和应用/抗体是由B细胞受抗原刺激后所分泌的蛋白质。二、单克隆抗体的制备单抗的特点单抗的制备原理单抗的制备过程1.动物免疫与亲本选择2）淋巴细胞免疫方法体内法体外法2.细胞融合3.HAT培养基筛选杂交瘤细胞细胞融合的选择示意图1）HAT选择系统原理：杂交瘤技术中，常选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷（HPRT-）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）骨髓瘤细胞为亲本之一，无补救途径。含氨基喋呤培养基抑制了全合成途径。淋巴细胞具有合成DNA的两条途径。杂种细胞通过互补作用获得HRPT或TK基因，可应用培养基中次黄嘌呤及胸腺嘧啶核苷，通过补救合成途径合成DNA。在HAT培养基中，HPRT-或TK-亲本细胞死亡，淋巴细胞亦逐渐死亡，只有杂种细胞存活。2）特异性杂交瘤细胞的筛选利用培养基对单抗进行鉴定的过程一种制备人肿瘤单克隆抗体的方案4.杂交瘤细胞的克隆化培养有限稀释法软琼脂培养法5.单抗的大规模生产三、单克隆抗体的改造和应用单抗作为体内体外诊断试剂1、单克隆抗体靶向制剂2）药物通过小分子与单抗连接通过一些小分子交联剂，把药物分子上的某些基团连接起来。小分子交联剂：如同型双功能试剂，包括戊二醛、顺乌头酸酐、马来酸酐、戊二酐；异型双功能试剂：N－琥珀酰胺基－3－丙酸和寡肽等。顺乌头酸酐制成的最常用3）药物通过大分子与抗体相连大分子聚合物：葡聚糖、多聚赖氨酸、多聚谷氨酸、聚合多肽和血清蛋白等。总之，利用单抗试剂合可以作为靶向药物，针对肿瘤、自身免疫系统疾病、各种病原体病等。2、杂交人－鼠单克隆抗体3、人源单克隆抗体4、抗体融合蛋白5、抗体酶6、单链抗体