第4章微生物生长1.微生物生长一个微生物细胞在适当外界环境条件下，不停地吸收营养物质，并按其本身代谢方式进行新陈代谢。假如同化作用速度超出了异化作用，则其原生质总量（重量、体积、大小）就不停增加，于是出现了个体生长现象。假如这是一个平衡生长，即各细胞组分是按恰当百分比增加时，则到达一定程度后就会发生繁殖，从而引发个体数目标增加，这时，原有个体已经发展成一个群体。伴随群体中各个个体深入生长，就引发了这一群体生长，这可从其重量、体积、密度或浓度作指标来衡量。微生物生长表现在微生物个体生长与群体生长两个水平上。2.微生物个体生长表现为个体质量和体积增加。3.微生物群体生长以微生物细胞数量或微生物群体细胞物质量增加作为生长指标。个体生长→个体繁殖→群体生长群体生长＝个体生长＋个体繁殖因而要了解微生物生长规律，就要了解微生物个体生长和群体生长两个方面。4.2微生物生长量测定4.2微生物生长量测定方法可依据菌体细胞量、菌体体积、重量直接测定，也能够依据某种细胞物质含量或某个代谢活动速度间接测定。一、测微生物总数1、计数器直接计数2、电子计数器计数（略）3、染色涂片计数将已知体积待测材料均匀涂布在载玻片已知面积内，染色后显微镜下计数。普通1cm2均匀涂片0.01ml样品。选择几个至十几个视野计数细胞数量。借助镜台测微尺测直径可计算出视野直径：每ml总数=视野平均菌数×1cm2/视野面积×100×稀释倍数提问：数了125个小格中有90个细菌，样品中细菌浓度是多少？(90个÷125)*400/0.1ml=2880个/ml适用范围：测定个体较大细菌或原生动物细菌个体若太小、过多，因为每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。5、百分比计数法将菌液与等体积血液混合后涂片，计算细菌数与红细胞百分比。依据百分比来计数比浊计数法以生物量为指标测定微生物生长5.比浊法（二）测定活菌数普通计数平板细菌生长菌落数以30~300个为宜。稀释液体计数法Themostprobablenumbermethod（液体稀释法）百分比计数法膜过滤培养法以数量改变对微生物生长情况进行测定统计－查表－计算（三）计算生长量：测细菌重量二、研究微生物生长方法微生物生长分个体生长和群体生长。培养方法有分批培养和连续培养。停滞期1、停滞期（迟滞期或适应期）（lagphase）:将细菌接种到某一培养基后，细菌并不马上繁殖而是经过一段适应期才能生长繁殖。调整适应表现在合成各种酶、完善体内酶系统及其它细胞成份。影响原因：（1）接种量。接种量大，停滞期可缩短（2）菌龄。菌种年轻，对数生长久接种，停滞期可能很短甚至不显著2、对数期（指数期）logphase细菌生长速度到达最大，数量以几何级数增加。世代时间计算：影响原因：（1）温度。在适温范围内，每增加10℃，生长速度提升1倍；（2）营养；营养越丰富，代时越短（3）氧气。好氧菌若能供给充分氧，可能使对数期延长。对数期实践意义①是代谢、生理研究良好材料②是增殖噬菌体最适宿主菌龄③是发酵生产中用作“种子”最正确种龄④G+染色判定时采取此期微生物3、稳定时（stationaryphase）因为营养消耗，供给不足及代谢产物积累，这时一部分菌死亡，细菌进入稳定时。特点：（1）菌数到达最高峰；（2）活菌数到达动态平衡；（3）生长速率为零；（4）开始积累贮存物质4、衰亡期declinephase因为营养缺乏和代谢产物积累造成本身中毒，细胞生长受阻，时间和菌数对数呈反比，生长曲线直线下降。特点：（1）生长速率为负值，活菌数降低；（2）细菌发生自溶现象autolysis（3）代谢产物大量积累；（4）形态多变，出现畸形或衰退形。4.3.2连续培养原理：假如在培养器中不停补充新鲜营养物质并及时不停地以一样速度排出培养物，理论上讲，对数生长久能够无限延长。恒浊连续培养能够不停提供含有一定生理状态细胞，能够得到以最高生长速率进行生长培养物，在微生物工业上利用此法可得到大量菌体及对应代谢产物如乳酸、乙醇。2、恒化连续培养维持进水中营养成份恒定，从而保持细菌恒定生长速率称恒化连续培养，也称恒组成连续培养。恒化连续培养基中，某种必须营养物质必须在低浓度作为限制性因子，其它成份过量。这么，细菌生长速率取决于限制性因子浓度。惯用限制性营养物质有作为N源氨、氨基酸；作为C源葡萄糖、麦芽糖、乳酸；生长因子、无机盐等。稀释度（率）：新鲜培养基流入速度为f，培养器中培养液体积为V，稀释度为D=f/V，表示单位时间内，新加入培养基体积与培养器内培养基总体积之比。伴随D增大，细菌浓度先升后降，但在相当大范围内这种改变不显著。当稀释度增大到最大比生长速