多聚酶链式反应扩增DNA片断一、基础知识脱氧核苷酸一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二脂键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端脱氧核苷酸结构式O5、DNA分子的双螺旋结构6、利用碱基互补配对规律的计算规律三：DNA双链中，一条单链的(A+T)/(G+C)的值与另一条互补链的(A+T)/(G+C)的值是相等的，也与整个DNA分子中的(A+T)/(G+C)的值相等例题：甲DNA分子中，A和T占25％，G和C占75%，乙DNA分子中，G和C占25％，A和T占75%，哪一个稳定？2、多样性（三）DNA的复制5、原材料②RNA引物的合成⑤DNA片断的连接边解旋边复制(过程）10、精确复制的原因①一条双链DNA分子，复制N次，形成的子代DNA分子中，含亲代DNA母链的有两个DNA分子，占子代DNA总数的2/2N；亲代DNA分子母链两条，占子代DNA中脱氧核苷酸链总数的2/2N+1=1/2N（四）PCR(多聚酶链式反应）3、PCR原理高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出①PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸（五）PCR的反应过程靶序列②复性（退火）靶序列③延伸靶序列靶序列循环次数4、PCR循环的结果二、PCR的实验操作PCR仪微量离心管1、准备①过程：盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序循环数PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：（一）理论上DNA扩增数目的计算2、过程④计算比色杯四、课题延伸五、实验小结