质粒DNA的提取和酶切今天实验分2个部分：一、实验原理质粒(plasmid)2.目的基因和质粒载体的连接基因克隆示意图质粒载体及其拷贝数质粒DNA的一般特性：质粒的三种构型：质粒DNA与宿主菌染色体DNA的区别：分离纯化质粒DNA的三个主要步骤：碱法抽提质粒的主要溶剂溶液Ⅱ：SDS、NaOHSDS碱裂解法制备质粒DNA的原理：如果要提高DNA的纯度，则可以用RNA酶消化除去RNA，并用酚抽提法除去残留的蛋白质。实验步骤：转移上清到新EP管，加入等体积饱和酚（约450μl）振荡混匀，离心12000rpm×10min转移上清到新EP管，加入等体积氯仿：异戊醇（共约450μl）振荡混匀，离心12000rpm×5min转移上清到新EP管加入2倍体积乙醇（约800μl）混匀，冰浴15min离心12000rpm×15min弃上清，100μl70%乙醇洗沉淀，12000rpm×2min弃上清，静置干燥，0.1×TE20μl溶解DNA酶切鉴定（10μl）保存（10μl）常见问题：第二部分：酶切鉴定（双酶切）反应体系（20ml）酶切反应实验操作基因工程诞生的技术突破限制性核酸内切酶pUC119图谱电泳结果：酶切结果