中国生物电泳网专业销售维修：各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电泳设备http:www.120.com各种DNA提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。4、加入25ul蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml混匀，50℃水浴3h5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm离心10min。弃上清。8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。9、12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。4、2500rpm离心10min，弃上清。中国生物电泳网专业销售维修：各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电http:www.120.com泳设备中国生物电泳网专业销售维修：各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电泳设备http:www.120.com5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。6、3000rpm离心10min，弃上清。7、倒置离心管，去掉残液。8、得白细胞，－80℃冻存。试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。三，氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：试验试剂：Ligsisbuffer：133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌试验步骤：1、500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，在充分颠混至清亮。4000rpm，以离心5min。弃上清液。2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。4、加入8μl的蛋白酶K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。6、取上清，每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。7、取上清，每管加入500μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，中国生物电泳网专业销售维修：各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电http:www.120.com泳设备中国生物电泳网专业销售维修：各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电泳设备http:www.120.com摇匀放入-20℃保存2h以上。9、12000rpm，以离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，12000rpm，以离心5min，去上清，50－60℃干燥。10、加入50μl灭菌去离子水，转弹，混匀。四，NaI提取法提取外周血白细胞基因组：实验步骤：1、取外周抗凝血（全血）100u