临床免疫学检验技术一、概述一、概述一、概述二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控四、临床免疫室内质控五、ELISA检测中的注意事项试剂因素:抗原抗体的纯度,抗体的亲和力、标记物的比活性或免疫活性等均对测定结果产生直接影响。试剂盒的稳定有效期,运输条件及储存方式等也均会对结果产生一定程度影响。ELISA检测的主要影响因素ELISA检测的主要影响因素ELISA检测的主要影响因素设备设备RF多为IgM型，也有IgG和IgA型。RF具有与变性IgG产生非特异性结合的特点，因此在ELISA检测过程中可能与固相上包被的抗体及酶标抗体结合，并将这藕连起来产生假阳性结果。这种情况在利用捕获法测定IgM型抗体的过程中尤其严重。因为捕获法测定IgM型抗体试剂盒中固相上包被的抗体为抗人μ链。内源性干扰内源性干扰溶血：Hb含有的血红素基团具有类似过氧化物的活性，若标本中Hb浓度过高则可能吸附于固相并于随后加入的HRP底物反应显色。外源性干扰：外源性干扰：溶血和非溶血、脂浊与非脂浊两组样品A值无统计学意义。AFP、RF、补体、自身抗体阳性样品的吸光度值明显高于对照组吸光度值,具有统计学意义,这可能是AFP、RF、补体和某些自身抗体能够与固相一抗,标记二抗Fc结合或影响它们的结合而造成假阳性建议:①使用抗凝血标本,便于标本的离心分离。②不抗凝血液标本过夜之后才检测,让血凝块更好地收缩,让标本中的非特异性物质被充分地包裹,降低非特异性反应所致的假阳性率[2]。③标本离心时,加大离心转速,延长离心时间,使红细胞和纤维蛋白充分沉降,使标本的离心分离更加彻底[3]④标本加样时避免加入红细胞和/或纤维蛋白,避免这两种干扰物质对实验结果的影响12份HBsAg阳性血清标本按常规检测,加显色剂后,不加终止剂,在酶标仪上每5min测一次410nmOD值三种不同的温育方式均会导致边缘效应,中央孔和周围孔的吸光度有显著性差异但水浴法温育比较稳定,边缘效应相对较小,孵箱法较大,微波法最为明显。12份HBsAg阳性血清标本按常规检测,加显色剂后,不加终止剂,在酶标仪上每5min测一次410nmOD值同步稀释测定法PEG法:酶标二抗试剂中加入4%PEG600振动态ELISA法:，该方法可将HOOK效应发生的临界浓度减少两个稀释度尽量选择测定范围宽的试剂盒；每一批号试剂盒随样本做高浓度质控(10000ng/ml)：注：计算公式：根据正态分布u检验单侧99.5%的可信限，u值=2.58以(CO-2s)作为阳性低限判断值,其中s值是以卫生部临检中心临界质控血清(HBsAg1ng/ml,抗HCV2NCU/ml的RCVK所测得的s值。CO至(CO—2s)的范围称为灰区。理由为:国产试剂盒的CO一般是以阴性对照A值加或乘一个常数得出,阴性对照是小牛血清而非人血清,A值不超过0105即按0105计算,亦即CO为一不变的常数,这样就忽视了试剂批间差、板间差和操作误差;国产试剂的灵敏度普遍不高,如HBsAg进口试剂的灵敏度为0.1～0.21ng/ml而国产试剂为0.5～11ng/ml,一般认为0.11ng/ml即有传染性。六、酶标仪的使用及维护六、酶标仪的使用及维护六、酶标仪的使用及维护六、酶标仪的使用及维护六、酶标仪的使用及维护