设计作品名称乙胺嘧啶片含量测定方案乙胺嘧啶片含量测定方案一、设计背景乙胺嘧啶，药品名息疟宁，化学名称2，4-二氨基-6-乙基-5-对氯苯基嘧啶，分子式C12H13ClN4，分子量248.71。纯品为白色结晶性粉末，无臭无味，微溶于乙醇和氯仿，在水中几乎不溶，熔点232～235℃，分子结构式如下：疟疾是由人类被蚊子叮咬后感染疟原虫而引起的传染病。这种疾病每年导致5.2亿人患病，约120万人死亡。乙胺嘧啶是治疗疟疾的药物之一，它能够抑制疟原虫的二氢叶酸还原酶，从而干扰疟原虫体内叶酸的正常代射。此外，乙胺嘧啶还能抑制蚊子体内疟原虫的发展，从而阻断传播。二、设计依据高效液相色谱法具有分离方式多样、适用范围广、选择性和专一性高、分析速度快等优点。各国药典中采用高效液相色谱法测定生物碱类药物含量的比例不断增加。高效液相色谱法是测定生物碱最常用的方法。在反相高效液相色谱法分析中，强极性组分首先从柱上洗脱，弱极性组分强烈地保留在固定相中，然后从柱上洗脱。根据药典规定，乙胺嘧啶片的含量测定包括色谱条件和系统适用性实验。色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取本品，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解，并定量稀释制成每1ml中约含13μg的溶液，照分光光度法，在272nm的波长处测定吸收度，吸收系数为309～330。选择紫外可见光检测器，检测波长272nm。三、设计方案1.仪器与试药（1）仪器①高效液相色谱仪:LC-210液相色谱仪控温范围:室温上10℃-89℃(增量1℃)温度稳定性误差:不大于0.5℃。②高压输液泵流量设定范围:0.10ml/min-9.90ml/min流量稳定性误差:不大于2%。非金属系统:25MPa。③紫外可见光检测器波长范围:基线噪声:≤3×10-5AU(动态，254nm)，基线漂移:≤5×10-4AU/h(动态，254nm)，电源电压.220V士22V，50Hz士0.5Hz。④超声脱气仪⑤过滤装置（2）试药乙胺嘧啶片，乙胺嘧啶对照品，甲醇（色谱纯），三乙胺（分析纯），磷酸（分析纯），高纯水，无水乙醇，乙醚，乙腈，1%乙酸溶液。2.色谱条件色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相:乙腈-1%乙酸溶液(46:54)，磷酸调节pH为3.0，检测波长272nm，流速1.0ml/min，进样量20μ1。选择适当的流动相(尤其是PH值)，以避免对固定相的破坏。有时在取样器前面可以连接预柱。在硅胶键合柱时，前柱为硅胶，使流动相在进入柱前被硅胶饱和，避免了硅胶基体在柱中的溶解。色谱柱经常用强溶剂冲洗以去除柱中残留的杂质。在清洗过程中，流动相应逐渐过渡到可混溶的溶剂，并且每个流动相的体积应该是柱的20倍左右。保持柱应充满乙腈或甲醇，柱接头要紧固，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内过夜或更长时间。3.供试品溶液的制备取20片乙胺嘧啶，精密称定，充分研细，精密称取适量（约相当于乙胺嘧啶10mg），置于100ml的量瓶中，加流动相适量，强烈振摇使乙胺嘧啶溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。4.对照品溶液的制备取40mg乙胺嘧啶对照品，置于50毫升容量瓶中，加入适量的流动相，摇动溶解，稀释至刻度，定容，摇匀，使溶液含800μg/ml乙胺嘧啶作为储备液。在使用前，原溶液定量稀释为每1ml约100μg乙胺嘧啶作为参考溶液。5.精密度试验精密量取下同一份对照品溶液适量，按设计方案第2项下色谱条件连续进样6次。结果显示，乙胺嘧啶峰面积平均值为99.50，ＲSD为0.85%(n=6)，表明仪器精密度符合药典规定。6.重复性试验根据设计方案第3项下的方法配制样品溶液，然后根据设计方案第2项下的色谱条件进样。用外标法计算乙胺嘧啶的含量。结果显示，乙胺嘧啶平均含量为99.5mg/g,ＲSD为0.85%(n=6)，表明该方法的重现性符合药典规定。7.稳定性试验取设计方案第3项下同一供试品溶液，按设计方案第2项下色谱条件分别在0、4、8、12、16、24h进样测定，结果显示，乙胺嘧啶峰面积平均值为99.50，ＲSD为0.85%(n=6)，表明供试品溶液自制备后24h内基本没发生改变。8.加样回收试验样本6份，精密称取(批号20170319，平均重量0.2998g,每片含乙胺嘧啶20.11mg),加入相当被测药物含量的90%-110%的对照品，于50ml量瓶中加入0.041mol/L乙腈-1%乙酸溶液(46:54)适量，冷却至室温，稀释至刻度，振荡，过滤，精密量取滤液6.0毫升至50毫升容量瓶，用50%甲醇稀释，摇匀，进样20μL测定。记录