第十五讲现代生物科技专题（选修三）【考纲点击】1.基因工程的诞生（Ⅰ）。2.基因工程的原理及技术（Ⅱ）。3.基因工程的应用（Ⅱ）。4.蛋白质工程（Ⅰ）。5.植物的组织培养（Ⅱ）。6.动物的细胞培养与体细胞克隆（Ⅰ）。7.细胞融合与单克隆抗体（Ⅱ）。8.动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础（Ⅰ）。9.胚胎干细胞的移植（Ⅰ）。10.胚胎工程的应用（Ⅱ）。知识互联网常考点21基因工程（工具、原理及应用）（5年34考★★★）1.（2011·浙江理综，6）将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（）。A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD.每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子解析：将ada通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶，每个大肠杆菌细胞中至少含有一个重组质粒，且每个质粒（重组质粒）至少含有一个限制酶识别位点，但每个限制酶识别位点只能插入一个ada，插入的ada成功表达，说明每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子。故C错误。答案：C（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有和。（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是______________________________________________________________________。（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。（4）反转录作用的模板是，产物是。若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。（5）基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是________________________________________________。解析本题着重考查基因工程方面的知识。限制性核酸内切酶可以将DNA分子切成两种类型的末端，平末端和黏性末端。两种不同酶切割之后便于相连，所产生的黏性末端必须相同。E·coliDNA连接酶可以连接黏性末端，T4DNA连接酶可以连接两种末端。反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增。基因工程中可以选用质粒、噬菌体、动植物病毒做载体。当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca2＋处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。答案（1）平末端黏性末端（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同（3）T4E·coli（4）mRNA单链DNAPCR（聚合酶链式反应）（5）动植物病毒λ噬菌体的衍生物（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱本考点各省市命题的要求不同，题型及赋分也不一致。江苏单科卷年年考且选择、非选择均出题；山东理综二选一，安徽卷、天津卷以及全国新课标卷往往以非选择性综合题形式出现；而浙江卷、全国大纲卷则以选择题形式命题。【押题】浙江大学农学院喻景权教授课题组研究发现，一种植物激素——油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。用油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因（如P450基因和红霉素抗性基因）表达和酶活性都得到提高，在这些基因“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒甚至无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了如下的实验操作，请回答下列问题。（1）获得油菜素内酯合成酶基因的方法有、。步骤①用PCR技术扩增基因时用到的耐高温酶通常是指；步骤②用到的酶有___________________________________________________。（2）图中导入重组质粒的方法是，在导入之前应用处理受体细菌。（3）导入重组质粒2以后，往往还需要进行检测和筛选，可用制成探针，检测是否导入了重组基因，在培养基中加入可将含有目的基因的细胞筛选出来。（4）请你为该课题命名：___________________________________________________。破题关键解析进行基因工程操作时，首先要获取目的基因，其方法有多种：从基因文库中获取、人工合成目的基因或PCR合成等。在构建基因表达载体的过程中，用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。图中的受体细胞是细菌，故用转化法导入表达载体，导入后，