台州市科技计划项目可行性报告厄贝沙坦抑制系膜增生性肾小球肾炎大鼠纤维化的作用机制二0一二年三月一、立项的背景和意义慢性肾脏病（CKD）已经成为人类面临的主要健康问题之一。各种原因引起的CKD最终均可导致肾小球硬化，进展为终末期肾病（ESRD）。美国最新一项研究表明CKD1～4期的发病率从1988～1994年的10%上升到1994～2004年的13.1%，并预示着未来CKD发病率会进一步升高[1]。2009年北京大学第一附属医院与北京疾控中心研究发现1999～2006年CKD在美国白人、非洲裔美国人、西班牙人及中国人中的发病率分别为19.03%、19.00%、15.99%、10.25%[2]。上海交通大学医学院附属瑞金医院肾脏科进行的流行病学调查显示，我国CKD的发病率高达9.4%～11.8%，上海市社区人群CKD的发病率为11.8%，而CKD的知晓率仅为8.2%。加之CKD起病隐匿，20%的CKD病人就诊时已是晚期。CKD发病率高，ESRD发病、患病率呈持续增长趋势，透析费用迅速增长，给社会、家庭带来沉重负担。ESRD已成为全世界关注的公共卫生问题。肾小球疾病是CKD的主要病因。在美国肾小球肾炎是导致ESRD的第三位病因，而在中国仍高居首位。在肾小球肾炎中又以系膜增生性肾炎（MsPGN）发病率最高。系膜细胞增生和系膜基质增多是许多进展性肾小球疾病的主要特征，也是促使肾小球硬化的独立因素。系膜细胞作为肾小球内最活跃的固有细胞,对多种内源性和外源性刺激因子发生反应,同时具有产生细胞外基质、分泌细胞因子、吞噬和清除异物等多种功能,其功能异常与多种肾脏疾病的发生、发展有关。本课题选用大鼠MsPGN模型，研究厄贝沙坦抑制MsPGN之结缔组织生长因子（CTGF）、纤维连接蛋白（FN）的表达，从分子水平分析厄贝沙坦对大鼠MsPGN进展的影响及可能的机制，旨在筛选出能早期抑制导致肾小球肾炎纤维化因子的药物，减少或延缓MsPGN进展为ESRD，从而减轻国家、社会、个人经济负担。二、国内外研究现状和发展趋势厄贝沙坦为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体抑制剂（ARB），能特异性地拮抗血管紧张素转换酶1受体(AT1)，通过选择性地阻断AngⅡ与AT1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用[3]。YukoIzuhara等人研究发现ARB除降压之外，还有独立于降压之外的肾保护作用[4]。PaulaVieitez等人研究发现厄贝沙坦可以通过抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）、重组人血小板生长因子-B（PDGF-B）、血管内皮生长因子（VEGF）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，延缓大鼠糖尿病肾病的进展[5]。有研究[3]显示调节血管紧张素受体对MsPGN的恢复起关键作用。CTGF为富含半胱氨酸的单体分泌蛋白，它存在于人类许多组织和体液中，其中以肾脏含量最多，成纤维细胞、内皮细胞、系膜细胞、软骨细胞和肿瘤细胞均可合成CTGF。CTGF具有促进成纤维细胞活化和细胞外基质（ECM）产生、积聚等功能，被认为是介导TGF-β促纤维化活性的下游效应因子。当机体损伤和纤维化发生时,CTGF高表达并作为TGFβ的下游介质介导纤维连接蛋白Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、整合素等细胞外基质的生成[6]。近年来许多研究[7-11]发现CTGF在众多肾小球疾病如MsPGN、慢性炎症性肾小球肾炎、梗阻性肾病、糖尿病肾病、局灶节段硬化性肾小球肾炎的纤维化方面起重要作用。因此CTGF在刺激细胞增生和ECM合成，促进组织器官纤维化方面起重要作用。姚芳[12]等人通过体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和厄贝沙坦干预,采用RT-PCR及Westernblot法分别检测CTGF和Ⅰ型跨膜基质金属蛋白酶(MT1-MMP的mRNA)及蛋白的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中Ⅳ型胶原的含量，发现厄贝沙坦可能部分通过抑制CTGF,增加MT1-MMP的表达，抑制肾小球系膜细胞基质分泌。许多研究多表明在引起系膜细胞ECM合成/降解失衡的众多因素中CTGF起着关键作用。纤维连接蛋白[13]（FN）是一种细胞外基质蛋白，具有调节细胞迁移、分化、增殖、存活的作用。最近有研究还发现它在ECM的重塑中也起着重要作用，抑制FN可以预防平滑肌细胞表型转化，维持平滑肌激动蛋白、肌球蛋白的稳定。系膜细胞上FN的表达与系膜细胞的增殖及ECM的聚集有关。TwiggSM[14]等发现在人成纤维细胞中,重组CTGF诱导FNmRNA的表达和蛋白质的合成,并呈剂量依赖性关系。参考文献：JosefCoreshMD,ElizabethSelvin,LesleyA,et,al.PrevalenceofChronicKidneyDiseas