移液管和可调式移液器的使用与误差分析.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-10 格式:PPT 页数:34 大小:7MB 金币:10 举报 版权申诉
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电泳是指带电粒子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象。电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。电泳的应用1.分离各种有机物:如蛋白质、酶、核酸等2.分析某种物质的纯度及分子量COO-COO-COOH╱+H+╱+H+╱Pr←————→Pr←————→Pr╲+OH-╲+OH-╲NH2NH3+NH3+PH>PIPH=PIPH<PI影响电泳速度的因素(4)支持介质:惰性材料,有一定坚韧度,易保存;吸附力要小;无电渗作用电渗:液体对固体的相对移动,由缓冲液的水分子和支持介质的表面之间所产生的相关电荷所引起。电渗与电泳方向相同,速度变大;反之变小。(5)温度:过高,由于产热增加、水分蒸发,对电泳不利。负极电泳技术优点:快速、准确、重现性好电泳方法分类按电场分常压(<500V,适用大分子)高压(>500V,适用小分子)按支持体分自由电泳支持物电泳:如醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂(糖)电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳仪器装置分:水平式、垂直式、悬架式电泳条件:水溶液(缓冲液)、支持物(区带电泳)、电场(电泳仪、电泳槽)垂直板电泳电泳仪(一)实验原理:以聚丙烯酰胺凝胶为电泳支持物,电荷、分子大小不一的各种血清蛋白经浓缩效应、电荷效应、分子筛效应而被精细分离,分离效果好,分辨率高。聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点聚丙烯酰胺凝胶的聚合反应聚丙烯酰胺凝胶的聚合方式AP-TMTED催化体系:属于化学聚合作用TMTED分子式为Bis将单体长链间连成网状结构:(1)浓缩效应a.胶孔不连续浓缩胶:3%,分离胶:7.5%b.pH值与离子成分不连续c.电位梯度不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)聚丙烯酰胺凝胶电泳有圆盘(disc)和垂直板(verticalslab)型之分,但两者的原理完全相同凝胶在玻璃管中聚合,样品分离区带染色后成圆盘状,因而称为圆盘电泳(discelectrophoresis)垂直板电泳染色方法实验目的实验原理人血浆蛋白质的等电点及分子量实验器材和试剂实验操作流程分离胶的制备凝胶溶液配制表电泳槽的准备加样电泳剥胶染色及漂洗1.丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经性毒剂,并对皮肤有刺激作用,注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。2.制胶时要充分摇匀,及时灌胶。3.加注水层必须缓慢细流。4.注意观察分界面。5.固体胶切忌倒入水池。下周实验