《生物化学实验》讲义实验》生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。2．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。3．实验台面应保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。实验完毕，仪器洗净放好，才能离开实验室。5．使用药品、试剂和各物品必须注意节约。使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。凡违犯操作规程或不听从指导而造成仪器设备损坏等事故，应按有关规定予以处理。6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。7．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。强酸、强碱溶液必须先用水稀释。废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内,不能倒入水槽或到处乱扔。8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外。9．每次实验课由班长或课代表负责安排值日生。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作,实验完毕后，整理仪器设备，做好清洁卫生，关闭电、水源及门窗，经指导教师同意，方可离开。10．及时认真完成实验报告。实验一氨基酸纸层析（3学时）层析技术简介:层析技术简介:发展史：一、发展史：层析分离技术在20世纪初就已得到应用：??1903年用于植物色素的分离；1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体；??1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析。定义：层析技术是利用被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、二、定义分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配，最终达到分离目的。三、层析技术的种类1、按流动相的状态分类：（1）液相层析（色谱）（2）气相层析（色谱）；2、按固定相的使用形式分类：（1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析（4）薄膜层析等；3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类：（1）吸附层析（2）分配层析（3）离子交换层析（4）凝胶层析（5）亲和层析等。实验目的：一、实验目的1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握分配层析法；3、掌握影响分配系数的因素。实验原理:二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。缺点是展开时间较长，分辨率低。分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度（Cs）/溶质在流动相的浓度（Cl）。溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的α值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。移动速率：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。影响Rf值的主要因素：Rf决定于被分离物质在两相间的分配系数以及两相间的体积比。由于在同一实验条件下，两相体积比是一常数，所以主要决定于分配系数。不同物质分配系数不同，Rf也就不同。（1）物质的结构和分子极性：结构不同极性不同，在两相中的溶解度也就不同，物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况，极性大的易溶于水中即固定相中，Rf小；反之Rf则较大；（2）层析溶剂：首先，溶剂的纯度要高，否则需经预先处理（酸碱抽提，重蒸馏，脱水干燥等）；其次，溶剂系统选择应考虑被分离的物质在溶剂系统中的Rf在0.05～0.85，样品被分离物质的组分的Rf之差最好大于0.05。之间溶质与溶剂间的相互作用；再次，有些溶剂系统需必须新鲜配制，如正丁醇-甲酸-水系统久放易引起酯化；最后，溶质和溶剂之间若能形成氢键，对分配系数的影响很大；（3）pH值：溶剂、滤纸和样品的pH值都会影响物质的解离，从而影响物质的极性和溶解度，使Rf改变；溶剂的pH还可以影响流动相的含水量，溶剂的酸碱度大，吸水量多，使极性物质的Rf增加（将滤纸和溶剂用缓冲溶液处理）；（4）滤纸：层析滤纸筛叽慷让藁ㄖ瞥桑舐酥揭褰啵实