维生素C含量测方法培训课件.ppt
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维生素C含量测方法维生素C(VitaminC,AscorbicAcid)又叫L-抗坏血酸,是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收,就分布到体内所有的水溶性结构中,正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有1500mg维生素C,最高储存峰值为3000mg维生素C。胶原蛋白的合成:胶原蛋白的合成需要维生素C参加,治疗坏血病预防牙龈萎缩、出血:牙龈是软组织,当缺乏蛋白质、钙、VC时易产生牙龈萎缩、出血。预防动脉硬化:可促进胆固醇的排泄,防止胆固醇在动脉内壁沉积,甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。抗氧化剂:可以保护其它抗氧化剂,如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸,防止自由基对人体的伤害。治疗贫血:使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁,促进肠道对铁的吸收,提高肝脏对铁的利用率,有助于治疗缺铁性贫血。防癌:丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散;VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异;阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。保护作用:在人的生命活动中,谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性和新陈代谢的正常进行至关重要。酶:谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽,在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式,即氧化型和还原型,还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC是一种强抗氧化剂,其本身被氧化,而使氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽,从而发挥抗氧化作用。提高人体的免疫力:白细胞含有丰富的VC,当机体感染时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力,提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成,提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋白的合成。提高CI补体酯酶活性,增加补体CI的产生。促进干扰素的产生,干扰病毒mRNA的转录,抑制病毒的增生。提高机体的应急能力:人体受到异常的刺激,如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激,会引发抵御异常刺激的紧张状态。该状态伴有一系列身体,包括交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转化而来,在此过程需要VC的参与。维生素C在抗病毒和预防病毒性传染病方面具有很高的应用价值。如果我们普遍认识到维生素C预防和治疗病毒传染病症的原理并且按量服用,就可以预防很多病毒的传播。目前研究维生素C测定方法的报道较多,如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等,各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。测定方法2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量2,6-二氯靛酚法原理维生素C2,6-二氯酚靛酚维生素C2,6-二氯酚靛酚(还原型)(氧化型,粉红色)(氧化型)(还原型)碘量法注意!测定时:加HAC使溶液呈弱酸性原因:(1)Vc还原性很强,在空气中很容易被氧化,在碱性介质中更甚(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应加HAC可减少VC的副反应,避免实验误差电位滴定法电位滴定法2,4一二硝基苯肼分光光度法pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂,形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸分光光度法差示旋光法差示旋光法差示旋光法2)差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容;一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,静置3min后,用220mm测定管,以前者为空白,测定后者的差示旋光度(△a)。文献结果:线性方程为△a=0205*C+0.05,r=0.99644)稳定性试验同一测试样品,在120min内,每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果:差示旋光度基本不变6)样品测定取维生素C片剂10片,称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc20mg/mL),滤去不溶物,测定滤液的差示旋光度,根据回归方程计算其含量。薄层扫描法(1)试纸的制备2,6-二氯靛酚钠(DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液,滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min,边浸边摇展开缸,使滤纸均匀着色,充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处,晾干后,立即放入干燥器中避光保存,备用。(2)缓冲溶液的配制称取柠檬酸水合物10g,放入1000ml容量瓶中,加入1M氢氧化钠420ml,并用蒸馏水稀释至刻度,此溶液的pH应为3.5。否则,用酸或碱调整pH值,保存于冰箱中。4)线性实验4.1)对照品溶液的配制精密称取维生素C标准品100mg,用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml,分别置于10ml容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度。4.2)测定用5l定量毛细管,分别吸取上述溶液各5l,点于试纸上。点样后晾干,并将试纸固定