人呼吸道合胞病毒融合蛋白真核表达及纯化的中期报告.docx
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人呼吸道合胞病毒融合蛋白真核表达及纯化的中期报告本研究旨在通过真核表达技术获得人呼吸道合胞病毒(humanrespiratorysyncytialvirus,以下简称HRSV)融合蛋白,并进一步进行纯化,为后续的分子和功能研究提供基础材料。本研究首先设计并合成了HRSV融合蛋白(F蛋白)完整序列的cDNA,并将其插入真核表达载体pCDNA3.1(+)中,构建了真核表达质粒pCDNA3.1(+)-F。将该质粒转染到293T细胞中,并通过Westernblot检测证实,在转染后的48小时内,F蛋白在细胞中表达,并能进入细胞膜。此外,我们还进行了1L规模的细胞培养和收获,用于后续的纯化过程。在蛋白纯化方面,我们采用离子交换和凝胶过滤两种方式进行。首先,通过DEAE离子交换柱和SephacrylS-300凝胶过滤柱进行粗提。结果表明,我们成功地从细胞培养上清液中获得了具有一定纯度的F蛋白,并进一步通过Westernblot验证其蛋白纯度。目前,我们正在进一步优化纯化策略,以获得更高的F蛋白纯度和产量,并计划进行后续的分子和功能研究。