遗传实验-人外周血培养与染色体制备学习PPT教案.pptx
上传人:王子****青蛙 上传时间:2024-09-13 格式:PPTX 页数:33 大小:1.4MB 金币:10 举报 版权申诉
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遗传学实验一、实验目的:二、实验原理:4、核型和带型:带型(bandingpattern)即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序,使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性,所以每一条染色体都有固定的分带模式,即称带型。常用的显带技术所显示的带有Q带、G带、C带、R带、T带等。就每一种分带技术而言,每一染色体的带型是高度专一和恒定的。三、实验用具及试剂:2.实验试剂:四、实验步骤:4、制片:(1)离心:从温箱中取出培养瓶,用吸管将培养液转入10ml的刻度离心管内。2000转/分,离心10分钟。(2)低渗:弃去上清液。加入37℃预热的0.075mol/LKCl低渗液8ml,用吸管轻轻吹打匀,放在37℃恒温水浴中40分钟。(此时配固定液:甲醇225ml+冰醋酸75ml)2000转/分,离心10分钟。(3)预固定:弃去上清液,在离心管中加入现配的预温的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液约1ml,轻轻混匀,室温固定5分钟。(4)再次离心:2000转/分离心10分钟。(5)第一次固定:弃上清液,加入固定液约8ml,立即用吸管吹打使之成细胞悬液,室温固定20分钟。2000转/分离心10分钟。(6)第二次固定:同第一次固定。(7)弃上清液,加入固定液0.5ml,用吸管吹打使均匀后制成细胞悬液。用封口膜封口,4℃保存备用。核型分析仪及核型分析五、注意事项:六、实验结果与分析:A组(No.1~3):是最大的一组染色体,它们的着丝粒在中部或几乎在中部,为中部着丝粒染色体;B组(N0.4~5):为两对大的亚中部着丝粒染色体,它们有明显的长臂和短臂;C组(N0.6~12+X):为中等大小的亚中部着丝粒染色体,它们大小相差不多,X染色体大小介于期间,一般难以区分;D组(N0.13~15):为中等大小的近端着丝粒染色体,它们的一个重要形态特征是随体,随体是一对着色很深的小球,处于短臂的末断,随体与短臂之间的区域很少着色;E组(N0.16~18):包括一对中着丝粒染色体(16)和两对亚中着丝粒染色体(17、18);F组(N0.19~20):为两对小的中部着丝粒染色体;G组(N0.21~22+Y):为最小的一组近端着丝粒染色体,在N0.21~22的短臂上可见随体。Y染色体常呈现异固缩状态,着色更深,可以识别。人类染色体核型分析结果重要参数:七、作业及思考题:八、参考文献:核型带型返回二、实验原理:带型(bandingpattern)即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序,使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性,所以每一条染色体都有固定的分带模式,即称带型。常用的显带技术所显示的带有Q带、G带、C带、R带、T带等。就每一种分带技术而言,每一染色体的带型是高度专一和恒定的。四、实验步骤:4、制片:(1)离心:从温箱中取出培养瓶,用吸管将培养液转入10ml的刻度离心管内。2000转/分,离心10分钟。(2)低渗:弃去上清液。加入37℃预热的0.075mol/LKCl低渗液8ml,用吸管轻轻吹打匀,放在37℃恒温水浴中40分钟。(此时配固定液:甲醇225ml+冰醋酸75ml)2000转/分,离心10分钟。(3)预固定:弃去上清液,在离心管中加入现配的预温的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液约1ml,轻轻混匀,室温固定5分钟。核型分析仪及核型分析重要参数: