实验二离体蛙心灌流实验专业:学号:姓名:实验目得1、学习离体器官(蛙心)灌流得方法。2、观察理化因素对蛙心活动得影响。实验原理蛙心得灌流:蛙心无营养性血管,离体之后采用人工灌流得方法,仍可保持其新陈代谢,心脏仍能有节律得自动收缩、舒张,并维持较长时间,心肌得营养就是通过心脏内膜液体得直接渗透而得。心肌:受体受体激动剂效应β1肾上腺素去甲肾上腺素心率增快、房室传导加速、心肌收缩力加强。M乙酰胆碱心率减慢、房室传导减慢、心肌收缩力减弱。1、任氏液:正常对照含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、Na2HPO4与蒸馏水,其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙得组织液相近。2、0、65%NaCl灌流:3、2%CaCl2灌流:4、1%KCl灌流:5、1:10000E灌流6、1:10000Ach灌流7、心得安β1受体阻断剂,抑制肾上腺素与β1受体结合,使E不能发挥作用。8、阿托品M受体阻断剂,抑制Ach减慢心率,加速房室传导,增加心房收缩力。实验器材离体蛙心任氏液、l％KCl溶液、2％CaC12溶液、0、65%NaCl溶液、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品实验步骤1、离子试剂任氏剂0、65%NaCl任氏液清洗2%CaCl2任氏液清洗1%KCl任氏液2、药物试剂E任氏液清洗心得安+E任氏液清洗Ach任氏液清洗阿托品+Ach任氏液结果与分析心率:34次/min最大收缩力:2、5g最小收缩力:1、1g图1正常脉搏曲线心率:35次/min最大收缩力:1、6g最小收缩力:1、1g图20、65%NaCl灌流脉搏曲线分析:细胞外液中Ca2+浓度降低,2期Ca2+内流减少,胞浆中Ca2+减少,心肌收缩力降低。心率:38次/min最大收缩力:3、5g最小收缩力:1、1g图32%CaCl2灌流脉搏曲线分析:心肌得舒缩活动与心肌肌浆中得钙离子浓度得高低有关。心肌肌浆网不发达,储钙能力差,易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中Na+与Ca2+有竞争性抑制,细胞外液Ca2+浓度升高,细胞兴奋时内流Ca2+增加,心肌收缩力增强。慢反应细胞4期去极速度加快,心率增快。心率:21次/min最大收缩力:3、4g最小收缩力:1、1g图41%KCl灌流脉搏曲线分析:K+与Ca2+在细胞膜上有竞争性抑制,细胞外液中K+浓度升高,K+抑制细胞膜对Ca2+转运,因此进入细胞内Ca2+降低,心肌得兴奋—收缩耦联作用减小,心肌收缩力减弱。心率:35次/min最大收缩力:3、5g最小收缩力:0、9g图5肾上腺素灌流脉搏曲线分析:肾上腺素与心肌细胞膜上得β1受体结合,心肌细胞与肌浆网膜Ca2+通透性增强,肌浆中Ca2+浓度升高,心肌收缩力增强。而且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离子亲与力下降,肌钙蛋白对钙离子得释放增强,肌浆网膜摄取钙离子得速度加快,钠-钙离子得交换增加,复极期向细胞外排出钙离子增多,心肌舒张速度增快,整个舒张过程明显加强。心率:34次/min最大收缩力:2、5g最小收缩力:1、1g图6心得安+E灌流脉搏曲线分析:心得安就是β1受体阻断剂,能够抑制肾上腺素与β1受体结合,使E不能发挥作用,因此心率及心肌收缩力保持不变。心率:33次/min最大收缩力:2、5g最小收缩力:1、1g图7乙酰胆碱灌流脉搏曲线分析:乙酰胆碱与心肌细胞膜上得M受体结合,心肌细胞膜K+通道得通透性增强,促进K+外流,动作电位期间Ca2+内流减少,心肌收缩力降低。同时乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道,导致Ca2+内流减少,心肌收缩力降低。心率:34次/min最大收缩力:2、5g最小收缩力:1、1g图8阿托品+Ach灌流脉搏曲线分析:阿托品就是M受体阻断剂,能够抑制Ach减慢心率,加速房室传导,增加心房收缩力,因此心率及心肌收缩力保持不变。讨论为何常用离体蛙心,而不常用离体哺乳类动物心脏做心脏灌流实验？蛙类得某些基本生命活动与生理功能与哺乳类动物有相似之处,它得离体组织、器官得生活条件比较简单,易于控制与掌握,来源丰富且价格低廉。离体蛙心不需要恒温与特殊得供氧设备,因此常被选作心脏灌流实验。而哺乳类心脏生活条件要求高,离体心脏灌流需要恒温环境,恒压或恒流灌流、供氧。实验影响因素多、设备多,心脏离体后存活时间较短。因此一般学生实验较少用哺乳类动物心脏做离体心脏灌流实验。离体蛙心为什么会节律性跳动？把离体与脱离神经支配、体液因素影响得动物心脏保持在适宜得环境中,在一定时间内仍能产生节律性兴奋与收缩活动,这就是由于心脏得静脉窦能自动按一定得兴奋节律产生兴奋,并传导到心房与心室,引起整个心脏又