离体心脏灌流离体心脏灌流的基本原理离体心脏灌流的意义离体心脏灌流的优点缺点和局限性离体心脏灌流方法经典的离体蛙心灌流——Straub法方法5.改变灌流液成分①不能损伤或结扎静脉窦②插管一定要进入心室腔③出现作用后立即用新鲜任氏液换洗三次，以免心肌受损④蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响结果八木法离体蛙心灌流注意事项哺乳类动物离体心脏灌流——Langendorff法离体心脏灌流实验将动物心脏取出，连接到特定的灌流装置，用灌流液灌注，排除了神经和体液的控制，配合特别分析软件记录心室内压、动脉血压和心电信号，自动分析各项生理参数，用于病理生理情况下的心功能与血流动力学改变等研究，在生理、病理生理以及药理学研究中已得到广泛地应用。能够进行精确恒压或恒流灌注。完善的预热系统和充氧通路能够保证恒温环境和灌流液氧饱和状态，从而有效保持离体心脏的生理活性，使实验顺利进行。可测定心输出量、冠脉流量、左室内压、心率、心电及心肌收缩性能等相关指标，观察药物对哺乳类动物离体心脏活动的影响，研究心肌缺血、缺氧病理损伤机制等。特点实验方法3.灌流：将心脏转移到一个双层壁的玻璃浴槽（类似于做离体小肠平滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在37℃。经主动脉插管灌注氧饱和的Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，持续保持适当的灌注压。4.连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部，利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测定收缩力等指标。Langendorff离体心脏灌流装置可用于测定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。取心脏和插管操作需迅速。插管不易过深，以免损伤主动脉瓣。灌流压大小恰当，压力过低则冠状动脉灌流量不足，过高则因主动脉根部过于扩张导致主动脉瓣关闭不全。灌流液温度恒定：37℃(95%O2+5%CO2饱和)。Langendorff法的缺陷与改进将可充水的小球囊固定在一根导管末端，经肺静脉、左心房和二尖瓣放入左心室。球囊内注水量与左心室容积相等，相当于前负荷大小，可根据实验要求选择预定的前负荷或改变前负荷。心脏收缩舒张过程给球囊一个有节律的压力，传导到压力传感器上。优点：压力变化和前负荷大小可以读出(mmHg)，可记录左心室收缩曲线，并记录心率。在肺静脉或左心房内插入另一根导管，灌流液经此导管进入左心房，并通过二尖瓣进入左心室，左心室收缩时将灌流液通过主动脉泵出，该方法可改变心脏的前后负荷，测定心输出量、压力－容积作功关系等。小球囊插入左心室，通过一个插管将球囊内的液体泵人一个体外的闭合循环通路中，并由两个弹性瓣膜控制其单向流动。每次心脏收缩时，由球囊排除的液体量相当于心脏的每搏输出量，可以通过顺序连接的一个流量计探头和一个积分仪进行测量。前负荷和后负荷可以分别调整。经主动脉逆灌进入冠状动脉的灌注液流量也可单独记录下来。其它改进Radnoti离体工作心脏灌流系统(WorkingHeartSystem)配合不同的测量装置可测量：左室压（LVP)心电温度心肌张力心输出量灌注压冠脉血流新陈代谢离子转基因研究冠状动脉结扎与心肌缺血再灌取冠状动脉流出液检测乳酸、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)。实验完成后，可测量心肌组织中的糖原、乳酸、ATP和磷酸肌酐。在缺血前或再灌注前5min通过灌注液给予药物观察其对肌缺血再灌损伤的影响。在间接体内试验中，在准备处死大鼠制备离体心脏前1h经口服给予实验药物观察其对肌缺血再灌损伤的影响。