会计学一、概述二、细胞融合的发现和发展(fāzhǎn)三、细胞融合的意义四、自发融合五、细胞融合的机理六、诱导融合七、体细胞杂种的遗传八、展望一、概述(ɡàishù)二、细胞融合的发现(fāxiàn)和发展1960年，法国的Barski等首先发现，两种不同类型的细胞在混合培养的过程中会自发融合形成融合细胞。1962年日本学者Okada发现一种日本血细胞凝集病毒(HVJ)能引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞的现象。在此基础上，用灭活的仙台病毒诱导产生了第一个种间的杂交细胞。以后人工诱导体细胞融合逐渐成为一门技术发展起来，建立了更有效的融合和选择杂交细胞的方法。广泛应用于种间、属间、科间，乃至动植物细胞间的融合，从而发展成为一门无论(wúlùn)在生物学的基础理论研究，或在医学、生物工程的应用研究方面均具广阔前景的细胞工程技术。三、细胞融合的意义(yìyì)自发融合现象在自然界中并不多见，可以在受精(shòujīng)过程、肌管形成过程、巨噬细胞的吞噬作用、巨噬细胞形成巨细胞合胞体（syncytiaofgiantcells）、病毒感染细胞过程①受精(shòujīng)过程②肌管的形成(xíngchéng)③巨细胞五、细胞融合的机理(jīlǐ)AnOverviewofmembranefunctions融合过程(guòchéng)中两个细胞膜的变化过程(guòchéng)/在离体的条件下，采用生物、化学或是物理的方法促使(cùshǐ)两个或多个细胞融合，形成一个杂种细胞的过程。目前诱导融合广泛进行的是体细胞的融合,融合的结果是产生一个杂交细胞（hybrid，也有称之为杂种细胞），所以体细胞的融合也称之为体细胞杂交（somatichybridization）。（一）诱发细胞融合的方法（二）融合细胞的筛选（三）融合细胞的克隆(kèlónɡ)化（四）融合细胞的应用（一）诱发(yòufā)细胞融合的方法1.病毒诱导(yòudǎo)的融合仙台病毒（HVJ）是一类被膜病毒，属于副黏液病毒，又称副流感病毒1或日本凝血病毒。圆球形，由RNA、衣壳和囊膜组成。病毒被膜含有糖蛋白，其表面(biǎomiàn)还布有许多神经氨酸酶（唾液酸酶）和凝血活性的突起。诱导细胞融合的不是仙台病毒内部的RNA，而是它的外膜。那么…？灭活后的病毒(bìngdú)颗粒结合到细胞表面。两受体细胞开始凝聚。两细胞的膜紧密结合。病毒(bìngdú)被膜与受体细胞的浆膜融合。病毒(bìngdú)颗粒周围的膜脱离整个膜，产生破口，在两细胞间形成细胞质通道（37℃、1-2min），通道继续扩大，病毒(bìngdú)颗粒流入细胞质内，细胞质互相融合。融合细胞变圆，融合结束。每一细胞必须有足够数量的病毒颗粒附在细胞膜上，细胞才能(cáinéng)凝集。凝集要在4℃中进行，几分钟内可见细胞聚集成小团。融合要在较高温度中进行，一般为37℃。2.化学融合(rónghé)剂诱发细胞融合(rónghé)聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)是一种多聚化合物，分子式为H(OHCH2-CH2)nOH)。商品名卡波蜡Carbowax,分子量200－20000，靠醚键的联结使其分子末端带弱负电荷，目前(mùqián)已衍生达50多种。1975年Kao和Chayluk报道PEG(polyethyleneglycol,PEG)可促进细胞融合，Pontecorvo报道PEG促融效率高于仙台病毒100-300倍。/3.电融合技术(jìshù)融合参数：主要包括交流电压、交变电场的振幅(zhènfú)频率、交变电场的处理时间；直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。//优点：操作简单；适用范围广；无需外源因子；毒性低；融合(rónghé)率高；参数易控制；可用于微量细胞融合(rónghé)；可在显微镜观察下定向诱导细胞融合(rónghé)并直接挑选杂交细胞。缺点：仪器昂贵，在融合大小不同细胞时存在问题；在融合膜成分差异(chāyì)较大的细胞时存在困难（二）融合(rónghé)细胞的筛选基于酶缺陷型细胞基于药物抗性所建立的杂种筛选3.基于营养缺陷型细胞所建立的杂种筛选4.由温度敏感(mǐngǎn)突变型细胞组成的杂种细胞的筛选5.具有所需性状的杂种细胞的筛选1.HAT选择系统－－基于酶缺陷型细胞杂种(zázhǒng)筛选基于HAT培养基的筛选(shāixuǎn)系统2.利用抗药性筛选系统：利用生物细胞(xìbāo)对药物敏感性差异筛选杂种细胞(xìbāo)。亲本A：对氨苄青霉素敏感，对卡那霉素不敏感亲本B：对卡那霉素敏感，对氨苄青霉素不敏感杂种细胞(xìbāo)可以在含有两种抗生素的培养基上生长3.营养互补筛选系统：细胞在缺